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sars37

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[求助] 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异

从板上挑的菌落都长的不是很好，基本上就只有几个菌落，挑完接种提质粒后PCR，发现条带只有100bp，目的基因有1000bp左右，而且还加了myc，为什么PCR之后就只有100bp了呢？

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1楼 2013-07-22 17:26:10

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sars37

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-22 20:48:52
估计是引物二聚体
应该是假阳性
建议菌落PCR，才接种提质粒

是把菌落划一半另一半PCR吗？

7楼2013-07-23 10:43:00

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xz2001199802

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★
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sars37(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:08:33

为什么不先用colony PCR确认之后，再提质粒，质粒提了之后，浓度是多少，有可能浓度高了，建议稀释一定倍数后再来PCR。并建议在质粒提取后做酶切，这样也能判断目的基因是否插入，插入方向是否正确

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越学越无知

2楼2013-07-22 19:58:03

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84146922

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【答案】应助回帖

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sars37: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:29

估计是引物二聚体
应该是假阳性
建议菌落PCR，才接种提质粒

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3楼2013-07-22 20:48:52

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lwiaanngg

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【答案】应助回帖

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sars37(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 21:06:43
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:21

一般来说，1kb左右的片段，连接正常转换正常的话，不应该只有几个点
结果告诉你连接不是很成功，重新做连接转化了

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4楼2013-07-22 20:48:58

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