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anonymous8973

木虫 (正式写手)

[求助] 载体连接后导入细菌,PCR有条带,双酶切没有,这是肿么了?

片段连到载体上,导入到细菌增殖,菌液PCR后有特异性条带,也特别亮,但提质粒后酶切没有目的条带,这是怎么了?谢谢。
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zfj20110603

金虫 (小有名气)

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anonymous8973(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-24 14:16:25
测序了没?酶切位点的碱基没有突变吧?如果确定片段正确无误的连到载体上的话就不应该了。
2楼2013-06-24 14:02:26
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

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anonymous8973: 金币+1, 有帮助, 谢谢 2013-06-25 18:43:41
菌液PCR不一定准确,有可能菌液里面本身就有这个基因,肯定的是肯定没有连上,楼主应该把你的操作过程发出来看下,交流一下。。。
keepon
3楼2013-06-25 08:43:51
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mada1986

木虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
楼主验证为什么不用提出的质粒做模板PCR?用的是哪种质粒?高拷贝还是低拷贝的?还有怎么知道质粒确实切开了?传张图上来大家探讨一下
4楼2013-06-25 08:58:25
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dshlove

木虫 (正式写手)

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如果,你的目的条带大小和载体大小相差太大就会出现这种问题的。
5楼2013-06-25 14:54:22
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

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anonymous8973: 金币+1 2013-06-25 18:44:09
重组质粒没有重组成功吧。
6楼2013-06-25 15:42:38
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月之印记

铜虫 (小有名气)

可能只有一侧连接上了
7楼2015-07-21 22:13:45
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