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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体连接后导入细菌，PCR有条带，双酶切没有，这是肿么了？
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anonymous8973

木虫 (正式写手)

[求助] 载体连接后导入细菌，PCR有条带，双酶切没有，这是肿么了？

片段连到载体上，导入到细菌增殖，菌液PCR后有特异性条带，也特别亮，但提质粒后酶切没有目的条带，这是怎么了？谢谢。
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1楼2013-06-24 12:52:00
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

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★
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anonymous8973: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-06-25 18:43:41
菌液PCR不一定准确，有可能菌液里面本身就有这个基因，肯定的是肯定没有连上，楼主应该把你的操作过程发出来看下，交流一下。。。
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keepon
3楼2013-06-25 08:43:51
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zfj20110603

金虫 (小有名气)

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★
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anonymous8973(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-24 14:16:25
测序了没？酶切位点的碱基没有突变吧？如果确定片段正确无误的连到载体上的话就不应该了。
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2楼2013-06-24 14:02:26
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主验证为什么不用提出的质粒做模板PCR？用的是哪种质粒？高拷贝还是低拷贝的？还有怎么知道质粒确实切开了？传张图上来大家探讨一下
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4楼2013-06-25 08:58:25
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dshlove

木虫 (正式写手)

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如果，你的目的条带大小和载体大小相差太大就会出现这种问题的。
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5楼2013-06-25 14:54:22
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