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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

???????:
10?: Originally posted by 84146922 at 2013-07-23 12:51:50
?????????????PCR???????
?????????????????????????????5??????????????PCR????
????0.5????????PCR...

你好,我刚刚PCR了一下,挑出的???都没有???带,出了没有连接上这个原因,在想是??是我的AMP浓度高了或者失效了导致??????长??出?我???200ul???液,加50mg/ul的AMP涂???
11楼2013-07-23 13:51:54
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sars37 at 2013-07-23 10:41:52
你好,这个实验已经重复几次了,每次涂板后长出的菌落都不是均匀分布在板上,是集中在边缘,菌落连在一起,然后我挑的是在边缘上独立出来的几个菌落。...

第一,重复几次实验不代表你做的方式是正确的,先不要再重复了,好好分析一下你拿到的数据。
第二,你酶切的实验做过么?先看看你挑出的那几个菌落,即使是空载,确保载体是正确的,如果不对,长出来的就是一些污染了。
第三,返回去仔细看看你的酶切,纯化,连接的全部过程,分子的实验大体上来说过程就那些,不过做得好坏就靠自己的细心了。包括做对照组,排除你转化中过程或感受态的问题。
祝你好运
12楼2013-07-23 21:08:24
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三撇五撇

银虫 (小有名气)

只长几个的情况也是有的,那是连接或者转化不给力啊。
应该先挑几个菌,做菌落PCR,然后在摇菌提质粒。
13楼2013-07-23 22:25:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by sars37 at 2013-07-23 11:43:21
你好,我想请问我涂板后的菌落只是在边缘长出来,而且都连在一起,我是挑了几个独立出来的做,这种情况可能是什么问题呢?...

菌液涂得太多,没有完全被板子吸收掉就倒置了,所以菌液流向边缘。一般直径10cm的板涂50-100μl。
14楼2013-07-24 00:31:37
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-23 21:08:24
第一,重复几次实验不代表你做的方式是正确的,先不要再重复了,好好分析一下你拿到的数据。
第二,你酶切的实验做过么?先看看你挑出的那几个菌落,即使是空载,确保载体是正确的,如果不对,长出来的就是一些污 ...

恩,反复想了下,估计还是我回收的浓度太低,没有连接好,我回收用的是QIAEXII这个试剂盒,回收的浓度比较低,是如果要回收这个胶里的DNA,我听说做的这个胶是要用EDTA调过的TBE来做吗?调到多少PH呢?
15楼2013-07-24 14:21:16
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