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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)
???????:
10?: Originally posted by 84146922 at 2013-07-23 12:51:50
?????????????PCR???????
?????????????????????????????5??????????????PCR????
????0.5????????PCR...

你好，我刚刚PCR了一下，挑出的???都没有???带，出了没有连接上这个原因，在想是??是我的AMP浓度高了或者失效了导致??????长??出？我???200ul???液，加50mg/ul的AMP涂???
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11楼2013-07-23 13:51:54
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sars37 at 2013-07-23 10:41:52
你好，这个实验已经重复几次了，每次涂板后长出的菌落都不是均匀分布在板上，是集中在边缘，菌落连在一起，然后我挑的是在边缘上独立出来的几个菌落。...

第一，重复几次实验不代表你做的方式是正确的，先不要再重复了，好好分析一下你拿到的数据。
第二，你酶切的实验做过么？先看看你挑出的那几个菌落，即使是空载，确保载体是正确的，如果不对，长出来的就是一些污染了。
第三，返回去仔细看看你的酶切，纯化，连接的全部过程，分子的实验大体上来说过程就那些，不过做得好坏就靠自己的细心了。包括做对照组，排除你转化中过程或感受态的问题。
祝你好运
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12楼2013-07-23 21:08:24
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三撇五撇

银虫 (小有名气)
只长几个的情况也是有的，那是连接或者转化不给力啊。
应该先挑几个菌，做菌落PCR，然后在摇菌提质粒。
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13楼2013-07-23 22:25:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sars37 at 2013-07-23 11:43:21
你好，我想请问我涂板后的菌落只是在边缘长出来，而且都连在一起，我是挑了几个独立出来的做，这种情况可能是什么问题呢？...

菌液涂得太多，没有完全被板子吸收掉就倒置了，所以菌液流向边缘。一般直径10cm的板涂50-100μl。
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14楼2013-07-24 00:31:37
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-23 21:08:24
第一，重复几次实验不代表你做的方式是正确的，先不要再重复了，好好分析一下你拿到的数据。
第二，你酶切的实验做过么？先看看你挑出的那几个菌落，即使是空载，确保载体是正确的，如果不对，长出来的就是一些污 ...

恩，反复想了下，估计还是我回收的浓度太低，没有连接好，我回收用的是QIAEXII这个试剂盒，回收的浓度比较低，是如果要回收这个胶里的DNA，我听说做的这个胶是要用EDTA调过的TBE来做吗？调到多少PH呢？
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15楼2013-07-24 14:21:16
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