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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异

从板上挑的菌落都长的不是很好，基本上就只有几个菌落，挑完接种提质粒后PCR，发现条带只有100bp，目的基因有1000bp左右，而且还加了myc，为什么PCR之后就只有100bp了呢？
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1楼 2013-07-22 17:26:10
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)
???????:
10?: Originally posted by 84146922 at 2013-07-23 12:51:50
?????????????PCR???????
?????????????????????????????5??????????????PCR????
????0.5????????PCR...

你好，我刚刚PCR了一下，挑出的???都没有???带，出了没有连接上这个原因，在想是??是我的AMP浓度高了或者失效了导致??????长??出？我???200ul???液，加50mg/ul的AMP涂???
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11楼2013-07-23 13:51:54
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sars37(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:08:33
为什么不先用colony PCR确认之后，再提质粒，质粒提了之后，浓度是多少，有可能浓度高了，建议稀释一定倍数后再来PCR。并建议在质粒提取后做酶切，这样也能判断目的基因是否插入，插入方向是否正确
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越学越无知
2楼2013-07-22 19:58:03
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sars37: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:29
估计是引物二聚体
应该是假阳性
建议菌落PCR，才接种提质粒
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3楼2013-07-22 20:48:52
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sars37(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 21:06:43
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:21
一般来说，1kb左右的片段，连接正常转换正常的话，不应该只有几个点
结果告诉你连接不是很成功，重新做连接转化了
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4楼2013-07-22 20:48:58
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