应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
51/1返回列表
查看: 6862  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了 已有1人参与

各位大虫，小弟最近扩增质粒，出现了怪现象，我的质粒转化的DH5a，挑取单克隆，再摇菌，提取质粒，跑胶发现质粒有很多条带，四条或者五条，就算是有超螺旋的和线性的，算起来也只有三条，不可能有四五条啊。我用BamH1 酶切（只有一个酶切位点），发现只有一条带。用EcoR1 酶切（只有一个酶切位点），也是一条带，用Sal 1 酶切（该质粒中无此酶酶切位点），发现切不开，条带和跑质粒一样。如果污染了其他质粒的话，用三种酶至少应该有个酶能切开污染的质粒吧，但都没发现杂带。如果没有污染其他质粒的话，质粒跑出来最多也是三条带啊，我这怎么出现了四五条。纠结啊…………，请各位给指点一二！
图片中 P：质粒，大约5000bp。
       Bam：BamH1酶切质粒
       Sal:    Sal1 酶切质粒
       Eco：EcoR1酶切的质粒
两个方框是单独挑取的两个菌落分别提的质粒。最左边和中间的是Marker5000。

0.8%Agarose
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

杂项

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-10 11:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小婧子zj at 2012-04-10 17:08:29:
单酶切的话，不应该大小一样吗？为啥你的酶切条带大小不一样呢？

方框里面是同一个质粒酶切的，BamH1 和EcoR1 条带大小是一直的
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-04-11 19:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
图中质粒的泳道，能明显看出五条带啊（箭头指示）
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-10 11:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-10 18:37:35
嗯...............
我也有跑出来五条带过，怀疑是提质粒时，gDNA污染，不过也觉得没有关系，转化时gDNA又不会转进去，况且后面还要再鉴定，你拿三个内切酶去做了鉴定，我这么干的话要是偶老板知道了....下场就惨了，所以个人看法，没有其他质粒污染的。
祝实验顺利 若有说错希望高手指点
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
3楼2012-04-10 11:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
呵呵，谢啦，实验室别的不多，内切酶还够用。请问如果是gDNA 污染的话，那么我拿这个质粒再次转化，再次提起质粒的话，会不会就会消除这些多余的带呢？
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-10 14:54:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金不中，共勉 +8 eulota 2026-08-26 8/400 2026-08-27 12:34 by lice_1987
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +5 Kittylucky 2026-08-27 5/250 2026-08-27 12:10 by 姜太公烤鱼
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 11:29 by xxniao123
[基金申请] 面上合作单位盖章 +3 ssyjh 2026-08-27 3/150 2026-08-27 09:59 by 阿拉贡aragon
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭