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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » NEB公司的酶可以酶切过夜吗？
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] NEB公司的酶可以酶切过夜吗？ 已有8人参与

酶切3个小时，没有切开，不知道是什么原因？
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1楼 2015-07-13 15:34:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大部分可以，有TIMESAVER标记的都可以，楼上说的很明白了。不过三小时切不开你应该考虑一下位点有没有错，条件有没有问题（比如有的酶不是37度），甚至酶有没有过期失活。
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4楼2015-07-14 00:09:43
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以，我经常切过夜，4h也是可以的
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努力打败一切
13楼2015-07-15 12:24:56
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普通回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些可以有些不行，去NEB网站上查查看
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2015-07-13 17:19:05
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-13 23:11:46
酶切时间长了主要担心星活性，即会识别不同序列剪切。具体的酶性质不一样，有些可能在甘油浓度高或离子浓度高或长时间酶切产生星活性。所以需要看用的什么酶。另外，如果是双酶切最好保证两个酶切位点有一定距离，选合适的buffer也很重要。
good luck!
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植物学
3楼2015-07-13 18:29:25
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fisherrx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
HF的都可以，普通的注意别甘油含量别超过体积5%，基本没什么问题。
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5楼2015-07-14 00:30:53
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zhouting816

金虫 (小有名气)

xmcll

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前做双酶切都是3~5个小时
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6楼2015-07-14 09:14:45
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-07-13 17:19:05
有些可以有些不行，去NEB网站上查查看

切了6个小时，切开了，谢谢

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7楼2015-07-14 09:38:54
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nonglong1 at 2015-07-13 18:29:25
酶切时间长了主要担心星活性，即会识别不同序列剪切。具体的酶性质不一样，有些可能在甘油浓度高或离子浓度高或长时间酶切产生星活性。所以需要看用的什么酶。另外，如果是双酶切最好保证两个酶切位点有一定距离，选 ...

6个小时切开了，谢谢

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8楼2015-07-14 09:40:49
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxzk at 2015-07-14 00:09:43
大部分可以，有TIMESAVER标记的都可以，楼上说的很明白了。不过三小时切不开你应该考虑一下位点有没有错，条件有没有问题（比如有的酶不是37度），甚至酶有没有过期失活。

TIMESAVER是什么意思？我切来了，6个小时，谢谢

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9楼2015-07-14 09:41:43
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fisherrx at 2015-07-14 00:30:53
HF的都可以，普通的注意别甘油含量别超过体积5%，基本没什么问题。

谢谢

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10楼2015-07-14 09:41:55
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