应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切
261/3返回列表123下一页
查看: 3796  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rendan911117

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切 已有12人参与

我双酶切用的酶  XhoI是赛默飞的  EcoRI是生工的  做了好多次  连接之后转化一直提不出质粒    两个酶能一起双酶切吗  如果可以 Buffer用哪个比较好啊   有没有做过这两个酶双酶切的啊  求指教 拜托啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-19 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-04 19:14:11
不同公司的最好不要一起切，因为有时候他们的buffer虽然名字一样，可是不是一样的东西。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-09-19 10:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

2× Tango buffer
EcoR I
Xho I
37℃
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2014-09-22 14:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc012351

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
rendan911117(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:05:36
可以做双酶切没问题，不同公司的我也混用过，挺好用的，回收的片段在跑次电泳能看见条带后面连接就不会有问题了
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2014-09-22 15:15:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

非常6+1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 12:28:10
两个不同公司的酶一起切问题不大，很有可能是你连接失败了，你完全可以先菌落PCR验证一下你的连接产物转化是否成功。转化成功了，不可能质粒提不出。若转化失败，可以考虑都用赛默飞的酶双切。
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-19 10:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 非常6+1 at 2014-09-19 10:54:21
两个不同公司的酶一起切问题不大，很有可能是你连接失败了，你完全可以先菌落PCR验证一下你的连接产物转化是否成功。转化成功了，不可能质粒提不出。若转化失败，可以考虑都用赛默飞的酶双切。

我之前菌落PCR 有的有条带有的没有   然后提质粒的时候没提出来…  一个体系  载体和目的基因的比例试了很多    但是都没有提出质粒…
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-19 16:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-19 10:22:52
不同公司的最好不要一起切，因为有时候他们的buffer虽然名字一样，可是不是一样的东西。

好的   我之前两种酶酶切用的tango buffer    酶切之后条带也和想要的差不多  但是连接不成功   怀疑可能是酶切的问题
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-19 16:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rendan911117 at 2014-09-19 16:39:35
好的   我之前两种酶酶切用的tango buffer    酶切之后条带也和想要的差不多  但是连接不成功   怀疑可能是酶切的问题...

恩
6楼2014-09-20 09:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小c的123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-22 17:01:03
看你的表述，应该是从酶切开始，构建重组质粒，然后转化，最后提质粒验证...最终的结果是提不出质粒，个人感觉情况还是蛮多的...酶切来说，一般是不推荐不同公司的酶进行同体系双酶切的，最好是同家公司，按照说明书上的双酶切体系...至于你提不出质粒，是转化板不长，还是有阳性克隆夸大培养之后提不出质粒呢?
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-21 11:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小小c的123 at 2014-09-21 11:06:25
看你的表述，应该是从酶切开始，构建重组质粒，然后转化，最后提质粒验证...最终的结果是提不出质粒，个人感觉情况还是蛮多的...酶切来说，一般是不推荐不同公司的酶进行同体系双酶切的，最好是同家公司，按照说明书 ...

我现在也还没有弄清楚提不出质粒的原因  所以很着急   今天又进行酶切  我总觉得是没有用一家的酶  所以酶切会有问题…
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-21 15:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分步酶切吧，多做两管然后回收
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-22 09:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzx984

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

直接选择TAKARA的，这两个酶效很高，用1XH的buffer 酶切2hr，效果很好，屡试不爽！
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-22 10:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rendan911117 的主题更新
261/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 293求调剂 +4 勇远库爱314 2026-04-08 4/200 2026-04-09 08:56 by 保奔超爱学习
[考研] 0860004 求调剂 309分 +5 Yin DY 2026-04-08 5/250 2026-04-09 08:16 by may_新宇
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-04 4/200 2026-04-08 08:41 by barlinike
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 一志愿武理车辆专硕总分 281 求调剂 +4 上岸研究生. 2026-04-02 4/200 2026-04-07 09:52 by 加油向未来啊
[硕博家园] 0856材料化工求调剂，一志愿211，初试成绩349 +4 江淮北月 2026-04-05 4/200 2026-04-06 22:44 by chenzhimin
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
[考研] 085600，320分求调剂 +16 大馋小子 2026-04-04 17/850 2026-04-06 07:58 by MOF_Catal
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 总分328生物与医药考数学求调剂 +7 aaadim 2026-04-02 9/450 2026-04-03 22:53 by syh9288
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭