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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切
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可帅儿

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得最好还是用同一个公司的，不得已才用不同公司的。我当时做酶切时两个都用赛默的，buf用2倍的tango
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
11楼2014-09-22 12:33:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

2× Tango buffer
EcoR I
Xho I
37℃
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12楼2014-09-22 14:44:21
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pc012351

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
rendan911117(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:05:36
可以做双酶切没问题，不同公司的我也混用过，挺好用的，回收的片段在跑次电泳能看见条带后面连接就不会有问题了
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13楼2014-09-22 15:15:18
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-22 14:44:21
2× Tango buffer
EcoR I
Xho I
37℃

好的  万分感谢～  我用的这个体系  然后现在跑胶显示切开了  开始做连接了  还在尝试载体和目的基因不同比例过程中…

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14楼2014-09-24 10:36:30
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pc012351 at 2014-09-22 15:15:18
可以做双酶切没问题，不同公司的我也混用过，挺好用的，回收的片段在跑次电泳能看见条带后面连接就不会有问题了

好的 我的能看见有条带   酶切的问题解决了又开始连接的问题了…

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15楼2014-09-24 10:37:33
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mili19910725

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by rendan911117 at 2014-09-24 10:36:30
好的  万分感谢～  我用的这个体系  然后现在跑胶显示切开了  开始做连接了  还在尝试载体和目的基因不同比例过程中…
...

你连接用的是哪个公司的酶？

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16楼2014-09-24 11:01:39
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by mili19910725 at 2014-09-24 11:01:39
你连接用的是哪个公司的酶？
...

用的takara的

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17楼2014-10-03 16:17:12
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rendan911117(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:05:58
这两个酶都很常用了，另外不同公司问题应该影响不大，但是既然实验出了问题，也不得不考虑这个原因，不妨换成同家公司的酶试一试。也有可能出在你连接这一块，假阳性。我也有个载体，菌p都能扩很亮，摇菌也能摇起来，但也提不出来质粒，和人交流也说是假阳性的，只能重新来。克隆不易，且行且珍惜

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天道酬勤
18楼2014-10-03 19:19:10
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-10-03 19:19:10
这两个酶都很常用了，另外不同公司问题应该影响不大，但是既然实验出了问题，也不得不考虑这个原因，不妨换成同家公司的酶试一试。也有可能出在你连接这一块，假阳性。我也有个载体，菌p都能扩很亮，摇菌也能摇起来 ...

好的 谢谢亲

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19楼2014-10-04 10:20:51
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rendan911117 at 2014-09-19 16:37:04
我之前菌落PCR 有的有条带有的没有   然后提质粒的时候没提出来…  一个体系  载体和目的基因的比例试了很多    但是都没有提出质粒…...

可能污染了，不知道楼主PCR阳性后有没有进一步进行测序验证，如果单菌落PCR阳性，提质粒没有出来的话，很有可能是污染。。
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20楼2014-10-17 09:05:25
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