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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切
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rendan911117

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切 已有12人参与

我双酶切用的酶  XhoI是赛默飞的  EcoRI是生工的  做了好多次  连接之后转化一直提不出质粒    两个酶能一起双酶切吗  如果可以 Buffer用哪个比较好啊   有没有做过这两个酶双酶切的啊  求指教 拜托啦
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1楼 2014-09-19 10:06:15
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rendan911117(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:05:58
这两个酶都很常用了，另外不同公司问题应该影响不大，但是既然实验出了问题，也不得不考虑这个原因，不妨换成同家公司的酶试一试。也有可能出在你连接这一块，假阳性。我也有个载体，菌p都能扩很亮，摇菌也能摇起来，但也提不出来质粒，和人交流也说是假阳性的，只能重新来。克隆不易，且行且珍惜

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天道酬勤
18楼2014-10-03 19:19:10
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-04 19:14:11
不同公司的最好不要一起切，因为有时候他们的buffer虽然名字一样，可是不是一样的东西。
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2楼2014-09-19 10:22:52
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非常6+1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 12:28:10
两个不同公司的酶一起切问题不大，很有可能是你连接失败了，你完全可以先菌落PCR验证一下你的连接产物转化是否成功。转化成功了，不可能质粒提不出。若转化失败，可以考虑都用赛默飞的酶双切。
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3楼2014-09-19 10:54:21
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 非常6+1 at 2014-09-19 10:54:21
两个不同公司的酶一起切问题不大，很有可能是你连接失败了，你完全可以先菌落PCR验证一下你的连接产物转化是否成功。转化成功了，不可能质粒提不出。若转化失败，可以考虑都用赛默飞的酶双切。

我之前菌落PCR 有的有条带有的没有   然后提质粒的时候没提出来…  一个体系  载体和目的基因的比例试了很多    但是都没有提出质粒…
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4楼2014-09-19 16:37:04
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