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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » XcmI酶切不开的可能原因
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小兜儿

铁虫 (初入文坛)

[求助] XcmI酶切不开的可能原因

目前在切一个pMD18T和PCR产物连接的重组质粒，上面有两个我加入的XcmI位点，中间隔了12bp长度碱基，10ul酶切体系，37℃2h，按说明书的体系要求。
       正常如果酶切成功我觉得电泳结果应该是分明的一条亮带，可是却是两条带，带的位置也不对。如果是没切开的话跟对照质粒还真不一样。酶才买的，应该不存在失效的问题，NEB公司。
       提取完质粒后用RNA酶水溶解，有没有可能是RNA酶的干扰呢？
       有没有哪位大人用过这个酶？

[ Last edited by 小兜儿 on 2011-10-10 at 16:00 ]
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1楼 2011-10-10 15:04:00
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小兜儿

铁虫 (初入文坛)
没人做过吗？自己顶一下……
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2楼2011-10-11 10:42:31
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

呵呵 可以查阅下18T上面是否带有XcmI位点
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可以用QQ找我……
3楼2011-10-11 10:57:38
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

多切一会儿，此酶活力低
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4楼2011-10-11 11:14:41
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小兜儿

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-11 10:57:38:
呵呵 可以查阅下18T上面是否带有XcmI位点

没有的……
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5楼2011-10-11 12:21:20
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小兜儿

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-11 11:14:41:
多切一会儿，此酶活力低

2个小时怎么样？要不要过夜切呢？
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-11 12:21:43
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-14 18:07:36
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-10-14 18:08:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小兜儿 at 2011-10-11 12:21:43:
2个小时怎么样？要不要过夜切呢？

我们室一般过夜 16度
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-10-11 14:55:28
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小兜儿

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
西瓜: 可能是提得不纯，乙醇或苯酚氯仿残留都会影响酶切的。 2011-10-14 18:07:41
wanhscn(金币+4): 鼓励新虫回贴！鼓励多来分子生物版！ 2011-10-14 18:07:56
好像是质粒出现的问题……重新提取了一次切开的条带就很清晰了，好奇怪到底是哪步能让我质粒有问题……
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8楼2011-10-14 10:26:08
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好low

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小兜儿 at 2011-10-14 10:26:08
好像是质粒出现的问题……重新提取了一次切开的条带就很清晰了，好奇怪到底是哪步能让我质粒有问题……

貌似我也遇到了这样的情况，可是质粒怎么会有问题的呢？？

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9楼2017-04-29 23:54:45
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