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coofir

铜虫 (初入文坛)

[求助] 为什么酶切后的质粒比没有酶切的跑得远? 已有3人参与

用NEB的酶对之前回收的条带进行酶切。37度水浴3小时后跑电泳,出现了图中的情况。点样孔分别为Marker,酶1,酶2,酶3,CK。一般来说酶切后环状质粒应该变为线状,跑的距离比没有切开的近,可是图中却是跑得更远。请问这是什么原因?图中的条带因为亮度太低我将它们调亮了些。

为什么酶切后的质粒比没有酶切的跑得远?
质粒求助.jpg
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liwuling

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
coofir: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-07 17:46:59
是不是你这个质粒有部分开环了,也就是变成了OC构型的,这种构型跑得比线性的也就是L构型的要慢。因为质粒是很容易开环的,实验中有点没注意就会发生。
4楼2015-07-07 17:23:05
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erland21411

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的电泳图,你是双酶切的吧?跑的更远说明跑的快啊,你酶切之后的质粒相对分子量减小了,自然就会跑的更快啊,就是你说的跑的更远
2楼2015-07-07 16:39:08
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电泳跑得快慢与分子大小、分子形态、分子状态等相关,你所说的“一般来说酶切后环状质粒应该变为线状,跑的距离比没有切开的近”这种情况是指分子量大小相差不大的情况下,即酶切下的片段不大的情况下,但是当酶切释放的片段相对质粒本身比较大的时候,决定快慢的主要因素不再是分子形态(超螺旋和链状),而是分子大小,谢谢
没有做不到,只有想不到!
3楼2015-07-07 16:43:27
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coofir

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by erland21411 at 2015-07-07 16:39:08
看你的电泳图,你是双酶切的吧?跑的更远说明跑的快啊,你酶切之后的质粒相对分子量减小了,自然就会跑的更快啊,就是你说的跑的更远

每个泳道都是一个酶切的,所以才很纳闷。
5楼2015-07-07 17:33:51
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