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单酶切呈线性后重组质粒的大小变吗已有2人参与
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| 正向目的片段（350bp左右）和载体连接后（2900bp），菌落PCR验证能出现350bp的条带，初步证明正向片段已连接。再进行单酶切验证，以未酶切的做对照，出来的胶带是未酶切的比单酶切的跑得快，但当时忘了放marker，想问下未酶切重组质粒和单酶切的线性质粒应该是多少bp的条带？ |
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- 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。
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鬼羽帝魂
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2楼2014-03-04 21:16:49
3楼2014-03-04 21:19:32
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细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子，只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。环形双链DNA分子有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的两条链都保持完整的环状结构，通常呈超螺旋构型。第二种是开环DNA(open circularDNA，oc DNA)，它的双链中的一条保持完整的环状结构，另一条单链上有一到几个切口。第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。 拟题出来时一条带，跑胶时间长点看看。 |
4楼2014-03-04 21:44:12
zhaozhibozhi
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