应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 单酶切呈线性后重组质粒的大小变吗
51/1返回列表
查看: 2084  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

498825991

新虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切呈线性后重组质粒的大小变吗 已有2人参与

正向目的片段（350bp左右）和载体连接后（2900bp），菌落PCR验证能出现350bp的条带，初步证明正向片段已连接。再进行单酶切验证，以未酶切的做对照，出来的胶带是未酶切的比单酶切的跑得快，但当时忘了放marker，想问下未酶切重组质粒和​单酶切的线性质粒应该是多少bp的条带？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-04 21:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:15
​单酶切的线性质粒应该是350+2900=3250bp的条带
未酶切重组质粒应该跑出2-3条带来，如果是2条带，可能3250在中间。如果是3条带，那么3250对应的就是中间那条很浅的带。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-04 21:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

498825991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-04 21:16:49
​单酶切的线性质粒应该是350+2900=3250bp的条带
未酶切重组质粒应该跑出2-3条带来，如果是2条带，可能3250在中间。如果是3条带，那么3250对应的就是中间那条很浅的带。

但是跑出了都是1条先，为什么是2条或者3条线呢
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-04 21:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 498825991 at 2014-03-04 21:19:32
但是跑出了都是1条先，为什么是2条或者3条线呢...

细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子，只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。环形双链DNA分子有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的两条链都保持完整的环状结构，通常呈超螺旋构型。第二种是开环DNA(open circularDNA，oc DNA)，它的双链中的一条保持完整的环状结构，另一条单链上有一到几个切口。第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。

拟题出来时一条带，跑胶时间长点看看。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-04 21:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:24
单酶切不应该以未酶切的作对照，应该以载体单酶切对照；这样才有可比较性。
赞一下(1人) 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-03-05 08:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 498825991 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭