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汕头大学海洋科学接受调剂
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498825991

新虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切呈线性后重组质粒的大小变吗 已有2人参与

正向目的片段(350bp左右)和载体连接后(2900bp),菌落PCR验证能出现350bp的条带,初步证明正向片段已连接。再进行单酶切验证,以未酶切的做对照,出来的胶带是未酶切的比单酶切的跑得快,但当时忘了放marker,想问下未酶切重组质粒和​单酶切的线性质粒应该是多少bp的条带?
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498825991

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-04 21:16:49
​单酶切的线性质粒应该是350+2900=3250bp的条带
未酶切重组质粒应该跑出2-3条带来,如果是2条带,可能3250在中间。如果是3条带,那么3250对应的就是中间那条很浅的带。

但是跑出了都是1条先,为什么是2条或者3条线呢
3楼2014-03-04 21:19:32
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:15
​单酶切的线性质粒应该是350+2900=3250bp的条带
未酶切重组质粒应该跑出2-3条带来,如果是2条带,可能3250在中间。如果是3条带,那么3250对应的就是中间那条很浅的带。
2楼2014-03-04 21:16:49
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 498825991 at 2014-03-04 21:19:32
但是跑出了都是1条先,为什么是2条或者3条线呢...

细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子,只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。环形双链DNA分子有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA,ccc DNA),它的两条链都保持完整的环状结构,通常呈超螺旋构型。第二种是开环DNA(open circularDNA,oc DNA),它的双链中的一条保持完整的环状结构,另一条单链上有一到几个切口。第三种是线状DNA,这种质粒的双链断裂呈线状。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时,出现不同的迁移速率,走得最快的是超螺旋构型,其次是线性构型,最慢的是开环构型。

拟题出来时一条带,跑胶时间长点看看。
4楼2014-03-04 21:44:12
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-05 10:02:24
单酶切不应该以未酶切的作对照,应该以载体单酶切对照;这样才有可比较性。
做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-03-05 08:56:20
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