24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 719  |  回复: 4

wwjinx

新虫 (小有名气)

[求助] 片段克隆问题 已有2人参与

各位大神,这一两个月我做连接DNA片段到T载体里送出去测序,测序公司总是活化培养不出我送的菌液,我的片段大小分别为200-800之间,T载体为PMA19-T,感受态为Top10,IPTG和X-gal均没问题。送出菌液之前,摇培时间4,、6、8、10、12和16小时都试过,菌液里分别加30%甘油和不加甘油也都试过了。这是什么原因???
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wwjinx(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:13:47
送菌液之前,先用通用引物或者你自己的特异引物做一次菌液PCR,最好是用通用引物上游+特异引物下游做一次菌液PCR,验证阳性克隆,再送出去测序。如果担心测序公司摇不好,你也可以自己把质粒提出来,送质粒去测序。当然,你也可以送PCR产物去测序(确认条带单一)或是自己切胶,送纯化后的PCR产物测序。
2楼2015-01-13 14:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该做一次复筛,去掉假阳性
3楼2015-01-13 16:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwjinx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by korchagin at 2015-01-13 16:12:45
应该做一次复筛,去掉假阳性

应该不存在假阳性的  挑菌摇培前都经菌落PCR验证过
4楼2015-01-13 18:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwjinx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-13 14:07:38
送菌液之前,先用通用引物或者你自己的特异引物做一次菌液PCR,最好是用通用引物上游+特异引物下游做一次菌液PCR,验证阳性克隆,再送出去测序。如果担心测序公司摇不好,你也可以自己把质粒提出来,送质粒去测序。 ...

这些问题我都考虑过,我只是不明白为什么我送出去的菌到测序公司后总是出现活化不出来的情况
5楼2015-01-13 20:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwjinx 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 12/600 2026-04-03 09:46 by 无际的草原
[考研] 338求调剂,一志愿能源动力,外语是日语203 +5 zzz,,r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 325分化学调剂 +4 15771691647 2026-04-02 4/200 2026-04-03 09:37 by 蓝云思雨
[考研] 理学07化学 303求调剂 +17 睿08 2026-03-27 18/900 2026-04-03 09:30 by zhouxiaoyu
[考研] 071010 323 分求调剂 +4 Baekzhy 2026-03-27 4/200 2026-04-03 09:28 by onemoretimer
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +7 王一一依依 2026-03-30 9/450 2026-04-02 21:15 by 1104338198
[考研] 085900土木水利336分求调剂 +4 Zhangjiangj 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:40 by 1753564080
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 385分 生物学(071000)求调剂 +6 qf626 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:39 by guoweigw
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +11 @taotao 2026-03-29 11/550 2026-04-02 10:04 by realme321
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 350求调剂 +7 阿佳~ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 生物学296求调剂 +10 汤圆包 2026-03-29 14/700 2026-04-01 10:44 by 求调剂zz
[考研] 0710生物学求调剂! +6 叙述文 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:39 by JourneyLucky
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 353求调剂 +3 江上枫_26 2026-03-28 3/150 2026-03-31 15:53 by jp9609
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
信息提示
请填处理意见