24小时热门版块排行榜    

查看: 2979  |  回复: 17

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


[求助] cDNA克隆问题,怎么拉全长出来 已有1人参与

楼主是个菜鸟刚接触。我现在想得到一个基因cDNA全长,我提取RNA反转录后,做RACE。这样做后不是只有一段一段产物,但没有全长产物。亲们知道这个全长产物怎么操作得到的吗?我以后想把这个基因克隆出来,转染用!
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiangqin90

新虫 (初入文坛)

首先先找同源物种克隆该基因的一部分,再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了,现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。
想要做的更好
6楼2015-01-09 13:07:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


没人啊

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-01-08 18:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
BBMC-2012: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-01-09 08:37:22
做3`-和5`-RACE的目的就是获取基因cDNA全长序列的两端序列,然后拼接获得完整的cDNA全长序列,有了全长序列后,根据你想扩增的片段,比如完整阅读框,设计上下游引物,用3`-RACE的模板或重新提RNA反转录产物作为模板进行PCR就获得了你要的基因,之后就可以构建质粒往下做实验了。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-09 00:43:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

RACE是为了获取基因的两头序列,如果你要做的是一个全长序列已知的基因,不用RACE,直接根据基因序列设计引物,反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-09 00:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
4楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-09 00:49:04
RACE是为了获取基因的两头序列,如果你要做的是一个全长序列已知的基因,不用RACE,直接根据基因序列设计引物,反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

嗯嗯,厉害!谢谢啦!困扰我一直想不明白,谢谢喽!我做的是不同物种有同属的有不同属的,目前只知道2个

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-01-09 08:39:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
6楼: Originally posted by xiangqin90 at 2015-01-09 13:07:11
首先先找同源物种克隆该基因的一部分,再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了,现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。

嗯嗯,是的,正在弄!多交流哈

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-01-09 16:47:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶叶梦

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物,跑胶要自己的片段,
8楼2015-01-13 22:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
8楼: Originally posted by 叶叶梦 at 2015-01-13 22:29:22
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物,跑胶要自己的片段,

怎么设的?求指教

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-01-13 22:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sandycool

铁虫 (正式写手)

你好,请问你反转录用的哪个试剂盒呢?
10楼2016-03-04 19:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 BBMC-2012 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 12/600 2026-08-21 19:46 by kulium
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +3 羊腰板 2026-08-21 3/150 2026-08-21 19:42 by kulium
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见