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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » cDNA克隆问题，怎么拉全长出来
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)

[求助] cDNA克隆问题，怎么拉全长出来 已有1人参与

楼主是个菜鸟刚接触。我现在想得到一个基因cDNA全长，我提取RNA反转录后，做RACE。这样做后不是只有一段一段产物，但没有全长产物。亲们知道这个全长产物怎么操作得到的吗？我以后想把这个基因克隆出来，转染用！
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叶叶梦

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1楼 2015-01-06 10:56:42
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)
首先先找同源物种克隆该基因的一部分，再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了，现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。
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想要做的更好
6楼2015-01-09 13:07:11
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普通回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
没人啊

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2楼2015-01-08 18:25:51
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
BBMC-2012: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-01-09 08:37:22
做3`-和5`-RACE的目的就是获取基因cDNA全长序列的两端序列，然后拼接获得完整的cDNA全长序列，有了全长序列后，根据你想扩增的片段，比如完整阅读框，设计上下游引物，用3`-RACE的模板或重新提RNA反转录产物作为模板进行PCR就获得了你要的基因，之后就可以构建质粒往下做实验了。

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3楼2015-01-09 00:43:46
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

RACE是为了获取基因的两头序列，如果你要做的是一个全长序列已知的基因，不用RACE，直接根据基因序列设计引物，反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

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4楼2015-01-09 00:49:04
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-09 00:49:04
RACE是为了获取基因的两头序列，如果你要做的是一个全长序列已知的基因，不用RACE，直接根据基因序列设计引物，反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

嗯嗯，厉害！谢谢啦！困扰我一直想不明白，谢谢喽！我做的是不同物种有同属的有不同属的，目前只知道2个

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5楼2015-01-09 08:39:31
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiangqin90 at 2015-01-09 13:07:11
首先先找同源物种克隆该基因的一部分，再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了，现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。

嗯嗯，是的，正在弄！多交流哈

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7楼2015-01-09 16:47:33
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叶叶梦

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物，跑胶要自己的片段，
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8楼2015-01-13 22:29:22
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 叶叶梦 at 2015-01-13 22:29:22
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物，跑胶要自己的片段，

怎么设的？求指教

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9楼2015-01-13 22:48:48
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sandycool

铁虫 (正式写手)
你好，请问你反转录用的哪个试剂盒呢？
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10楼2016-03-04 19:03:14
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