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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


[求助] cDNA克隆问题,怎么拉全长出来已有1人参与

楼主是个菜鸟刚接触。我现在想得到一个基因cDNA全长,我提取RNA反转录后,做RACE。这样做后不是只有一段一段产物,但没有全长产物。亲们知道这个全长产物怎么操作得到的吗?我以后想把这个基因克隆出来,转染用!
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)

首先先找同源物种克隆该基因的一部分,再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了,现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。
想要做的更好
6楼2015-01-09 13:07:11
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普通回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)


没人啊

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-01-08 18:25:51
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
BBMC-2012: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-01-09 08:37:22
做3`-和5`-RACE的目的就是获取基因cDNA全长序列的两端序列,然后拼接获得完整的cDNA全长序列,有了全长序列后,根据你想扩增的片段,比如完整阅读框,设计上下游引物,用3`-RACE的模板或重新提RNA反转录产物作为模板进行PCR就获得了你要的基因,之后就可以构建质粒往下做实验了。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-09 00:43:46
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

RACE是为了获取基因的两头序列,如果你要做的是一个全长序列已知的基因,不用RACE,直接根据基因序列设计引物,反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-09 00:49:04
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
4楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-09 00:49:04
RACE是为了获取基因的两头序列,如果你要做的是一个全长序列已知的基因,不用RACE,直接根据基因序列设计引物,反转录产物做模板PCR就可以得到片段往下构建质粒

嗯嗯,厉害!谢谢啦!困扰我一直想不明白,谢谢喽!我做的是不同物种有同属的有不同属的,目前只知道2个

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-01-09 08:39:31
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
6楼: Originally posted by xiangqin90 at 2015-01-09 13:07:11
首先先找同源物种克隆该基因的一部分,再进行3'RACE和5'RACE即可以得到全长了,现在我正好也在用此种方法克隆一个基因的全长。

嗯嗯,是的,正在弄!多交流哈

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-01-09 16:47:33
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叶叶梦

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物,跑胶要自己的片段,
8楼2015-01-13 22:29:22
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
8楼: Originally posted by 叶叶梦 at 2015-01-13 22:29:22
我们要全场一般直接在序列的两头设计引物,跑胶要自己的片段,

怎么设的?求指教

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-01-13 22:48:48
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sandycool

铁虫 (正式写手)

你好,请问你反转录用的哪个试剂盒呢?
10楼2016-03-04 19:03:14
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