应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 急救！cDNA做模板进行PCR克隆出的质粒测出了一段内含子
51/1返回列表
查看: 1901  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

珉珉的小辫

金虫 (小有名气)

[求助] 急救！cDNA做模板进行PCR克隆出的质粒测出了一段内含子

最近在用拟南芥cDNA模板克隆一个基因，基因长2.3Kb.用gateway方法和topo克隆同时筛选出了阳性菌落，接下来分段测序。这时问题出来了，在两种方法克隆出来的质粒中均测出了一段长32碱基的内含子。问题是两次方法用的是不同cDNA模板，所以我觉得可以排除模板的问题了吧。现在的问题就是想破脑袋也不明白为什么会出现这种情况。各位高手，牛人，麻烦帮忙分析一下吧。不胜感激！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-10 18:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
珉珉的小辫: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-11 09:41:01
这种情况我遇到过，刚开始以为是splicing variant，后来发现插入的intron会导致蛋白翻译很快终止，于是我就另挑了菌落测序，就找到正确的不带intron的了。所以楼主还是再挑几个克隆测序吧。至于为什么会出现这种情况，我也不知道，O(∩_∩)O哈哈~
赞一下 回复此楼
我是胖虎，我是孩子王！
2楼2013-12-11 07:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

珉珉的小辫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaolf at 2013-12-11 07:46:26
这种情况我遇到过，刚开始以为是splicing variant，后来发现插入的intron会导致蛋白翻译很快终止，于是我就另挑了菌落测序，就找到正确的不带intron的了。所以楼主还是再挑几个克隆测序吧。至于为什么会出现这种情况 ...

谢谢！！也就是说只能不断地重复了？
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-11 09:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌
引用回帖:
3楼: Originally posted by 珉珉的小辫 at 2013-12-10 17:40:43
谢谢！！也就是说只能不断地重复了？...

反正我是挑了三个克隆，一个有intron插入，一个有点突变，一个是正确的。
赞一下 回复此楼
我是胖虎，我是孩子王！
4楼2013-12-11 13:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)
★ ★
xy656691: 金币+2, 呵呵呵，我赞同 2013-12-12 10:25:54
还有一种可能是数据库预测的cDNA是不对的，这个很多的
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-11 22:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 珉珉的小辫 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭