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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 以cDNA为模板为什么能扩出内含子？
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狗蛋儿

木虫 (小有名气)

[求助] 以cDNA为模板为什么能扩出内含子？ 已有1人参与

求助各位高手：
我在扩一个基因，用的模板是cDNA（抽提完RNA后已用DNase消化）。
困惑一：扩增出了内含子。
困惑二：该基因有8个内含子，只扩增出了4个，求助原因？
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1楼 2013-05-21 20:59:35
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
狗蛋儿(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 09:01:54
真核生物RNA有选择性剪接，你扩增到的可能是某种特定剪接方式产物
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2楼2013-05-21 21:02:12
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hudazhangyi

银虫 (正式写手)
可变剪切，我也遇到这种情况，我是做植物的。即便读不通也很正常
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9楼2013-05-22 22:20:20
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普通回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
u sure DNase I 消化完完全全的去掉gDNA了？
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伟大航线....
3楼2013-05-21 21:03:01
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狗蛋儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangpeng227 at 2013-05-21 21:02:12
真核生物RNA有选择性剪接，你扩增到的可能是某种特定剪接方式产物

可是这样转录出来的序列由于内含子的存在翻译的时候不能读通
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4楼2013-05-21 21:53:58
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狗蛋儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2013-05-21 21:03:01
u sure DNase I 消化完完全全的去掉gDNA了？

假如没有消化完全 应该扩出更多的内含子啊
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5楼2013-05-21 21:55:03
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 狗蛋儿 at 2013-05-21 21:55:03
假如没有消化完全 应该扩出更多的内含子啊...

也有道理呵...
做个用gDNA的阳性对照看看呗。
也有可能有些内含子不好扩，一些结构、GC等的问题，或者量不够。
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伟大航线....
6楼2013-05-21 22:18:44
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 狗蛋儿 at 2013-05-21 21:53:58
可是这样转录出来的序列由于内含子的存在翻译的时候不能读通...

不能读通应该也是正常的,不同的剪接方式最终翻译产物可能是不同的.
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7楼2013-05-22 10:50:33
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狗蛋儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2013-05-22 10:50:33
不能读通应该也是正常的,不同的剪接方式最终翻译产物可能是不同的....

原来编码500多个AA 现在不到100AA，连保守motif都没有
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8楼2013-05-22 19:30:23
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狗蛋儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hudazhangyi at 2013-05-22 22:20:20
可变剪切，我也遇到这种情况，我是做植物的。即便读不通也很正常

每次扩增就这一条带 我怎么才能获得正确的序列呢 或者这种序列存在么？
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10楼2013-05-24 17:00:29
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