24小时热门版块排行榜    

查看: 1607  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

珉珉的小辫

金虫 (小有名气)

[求助] 急救!cDNA做模板进行PCR克隆出的质粒测出了一段内含子

最近在用拟南芥cDNA模板克隆一个基因,基因长2.3Kb.用gateway方法和topo克隆同时筛选出了阳性菌落,接下来分段测序。这时问题出来了,在两种方法克隆出来的质粒中均测出了一段长32碱基的内含子。问题是两次方法用的是不同cDNA模板,所以我觉得可以排除模板的问题了吧。现在的问题就是想破脑袋也不明白为什么会出现这种情况。各位高手,牛人,麻烦帮忙分析一下吧。不胜感激!!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

引用回帖:
3楼: Originally posted by 珉珉的小辫 at 2013-12-10 17:40:43
谢谢!!也就是说只能不断地重复了?...

反正我是挑了三个克隆,一个有intron插入,一个有点突变,一个是正确的。
我是胖虎,我是孩子王!
4楼2013-12-11 13:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
珉珉的小辫: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-11 09:41:01
这种情况我遇到过,刚开始以为是splicing variant,后来发现插入的intron会导致蛋白翻译很快终止,于是我就另挑了菌落测序,就找到正确的不带intron的了。所以楼主还是再挑几个克隆测序吧。至于为什么会出现这种情况,我也不知道,O(∩_∩)O哈哈~
我是胖虎,我是孩子王!
2楼2013-12-11 07:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

珉珉的小辫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaolf at 2013-12-11 07:46:26
这种情况我遇到过,刚开始以为是splicing variant,后来发现插入的intron会导致蛋白翻译很快终止,于是我就另挑了菌落测序,就找到正确的不带intron的了。所以楼主还是再挑几个克隆测序吧。至于为什么会出现这种情况 ...

谢谢!!也就是说只能不断地重复了?
3楼2013-12-11 09:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)

★ ★
xy656691: 金币+2, 呵呵呵,我赞同 2013-12-12 10:25:54
还有一种可能是数据库预测的cDNA是不对的,这个很多的
5楼2013-12-11 22:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 288求调剂 +11 于海海海海 2026-03-19 11/550 2026-03-19 16:30 by 30660438
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-18 9/450 2026-03-19 10:28 by 星空星月
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
信息提示
请填处理意见