24小时热门版块排行榜    

查看: 2029  |  回复: 3

蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建成功后双酶切什么都没切下来是什么原因 已有3人参与

我成功构建了重组载体后转到大肠保存,测序也正确,之前也做过质粒双酶切,可以切出目的条带,可是这两天从-80拿菌活化重提质粒进行双酶切后没有目的基因条带,只感觉质粒被切成了两段,两条大概都在7、8kb,我的质粒大小是9kb,目的基因大小是300多bp,双酶切体系为20微升,加了3微升质粒,酶各0.5微升,这到底是什么原因呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-04 12:46:26
蓝色泡沫321: 金币+5, ★★★很有帮助, 已经扩大体系提高质粒浓度,成功切开了 2014-11-05 10:09:56
1)质粒浓度有多高?3uL貌似有点少了,尤其对于只有300bp的小条带来说。我一般酶切40uL体系,质粒2ug以上。
2)做个菌液PCR鉴定一下。
2楼2014-11-04 09:12:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝色泡沫321: 金币+5, ★★★很有帮助, 已经扩大体系提高质粒浓度,成功切开了 2014-11-05 10:10:05
不确定因素,建议先单酶切看看质粒,是不是操作失误引起的
学习再学习,努力再努力。
3楼2014-11-04 15:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝色泡沫321: 金币+5, ★★★很有帮助, 已经扩大体系提高质粒浓度,成功切开了 2014-11-05 10:10:15
载体9K,目的片段300bp,两者的比例是30:1,这种情况下就算是能切,浓度也是需要很高的,在电泳检测时可能小片段会看不到条带,建议做个PCR验证一下是否能P出目的条带。
4楼2014-11-04 17:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蓝色泡沫321 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 0856调剂 +4 刘梦微 2026-02-28 4/200 2026-03-01 15:35 by 吸一口猫气
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
请填处理意见