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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ljy241

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后如何才能让载体自连? 已有1人参与

我想对一个质粒进行改造,要把其中一段序列去掉,需要用SacII和PmlI这两个酶。胶回收后的载体如何才能再自己连起来?
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 01:35:37
...
    要削成平端吗,再自连比较合适?用有外切酶活性的聚合酶来消就似乎可以了
Let God do with it as He wills
2楼2014-02-26 13:35:27
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小love肖

铜虫 (初入文坛)

你可以用Pfu酶把末端补齐,变成平末端后再连接转化;如果载体不大,可以用反向PCR去掉的不想要的序列,不过要用高保真酶
3楼2014-02-27 11:38:03
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lin1987

新虫 (初入文坛)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 01:35:58
要是这段序列在基因上面,以上的两种方法都很有可能会使阅读框改变,不如合成一段序列同时不会改变阅读框,使他们两端带有这两个配对的没切位点,直接连接,就像构建sh质粒一样。
4楼2014-02-28 12:03:14
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ljy241

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-26 13:35:27
...
    要削成平端吗,再自连比较合适?用有外切酶活性的聚合酶来消就似乎可以了

你们一般用什么聚合酶,体系和条件是怎么样的?
5楼2014-02-28 23:19:38
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

引用回帖:
5楼: Originally posted by ljy241 at 2014-02-28 23:19:38
你们一般用什么聚合酶,体系和条件是怎么样的?...

是指削成平端,还是补成平端
Let God do with it as He wills
6楼2014-03-01 19:42:03
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ljy241

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-03-01 19:42:03
是指削成平端,还是补成平端...

削平还是补平都无所谓
7楼2014-03-05 14:05:46
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