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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
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yicao917

木虫 (小有名气)

[交流] 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？

本人用BamHI单酶切载体，再用小牛碱性磷酸酶去磷酸化。做了未去磷酸化加T4连接的对照，以及去磷酸化后未加T4连接酶就直接转化的对照，以及去磷酸化后加T4连接酶连接后转化的对照。结果为去磷酸化的长出近千个克隆，去磷酸化后没加T4的没长，而去磷酸化加T4连接长了几十个，可见去磷酸化效果还是很明显的，可是为什么还会有几十个克隆这么多？再补加碱性磷酸酶继续去磷酸化结果也一样，总有几十个克隆产生，这些产生的克隆是自连产生的吗？去磷酸化后为什么还会自连呢？如何能把自连减少到基本没有？所用的感受态是DH5α，该菌株能修复这样去磷酸化的空载自连吗？
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1楼 2012-03-18 23:09:22
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化时间延长
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2楼2012-03-18 23:29:16
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ynkuaile

木虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化加T4连接长了几十个.加了连接酶长几十个不多，这个也和你连接时间有关的。
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3楼2012-03-20 09:29:03
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xiangyunch

金虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
当然会了。
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4楼2012-03-20 09:40:53
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
请问你加去磷酸化酶作用了多长时间。
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5楼2013-04-08 16:30:43
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dulei

木虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化不彻底。
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6楼2014-03-14 16:07:33
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