应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
51/1返回列表
查看: 4396  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yicao917

木虫 (小有名气)

[交流] 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？

本人用BamHI单酶切载体，再用小牛碱性磷酸酶去磷酸化。做了未去磷酸化加T4连接的对照，以及去磷酸化后未加T4连接酶就直接转化的对照，以及去磷酸化后加T4连接酶连接后转化的对照。结果为去磷酸化的长出近千个克隆，去磷酸化后没加T4的没长，而去磷酸化加T4连接长了几十个，可见去磷酸化效果还是很明显的，可是为什么还会有几十个克隆这么多？再补加碱性磷酸酶继续去磷酸化结果也一样，总有几十个克隆产生，这些产生的克隆是自连产生的吗？去磷酸化后为什么还会自连呢？如何能把自连减少到基本没有？所用的感受态是DH5α，该菌株能修复这样去磷酸化的空载自连吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 敲除整合

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-18 23:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
请问你加去磷酸化酶作用了多长时间。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-08 16:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

shaquila

金虫 (正式写手)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化时间延长
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-18 23:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化加T4连接长了几十个.加了连接酶长几十个不多，这个也和你连接时间有关的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-20 09:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dulei

木虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
去磷酸化不彻底。
回复此楼
6楼2014-03-14 16:07:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭