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载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
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| 本人用BamHI单酶切载体，再用小牛碱性磷酸酶去磷酸化。做了未去磷酸化加T4连接的对照，以及去磷酸化后未加T4连接酶就直接转化的对照，以及去磷酸化后加T4连接酶连接后转化的对照。结果为去磷酸化的长出近千个克隆，去磷酸化后没加T4的没长，而去磷酸化加T4连接长了几十个，可见去磷酸化效果还是很明显的，可是为什么还会有几十个克隆这么多？再补加碱性磷酸酶继续去磷酸化结果也一样，总有几十个克隆产生，这些产生的克隆是自连产生的吗？去磷酸化后为什么还会自连呢？如何能把自连减少到基本没有？所用的感受态是DH5α，该菌株能修复这样去磷酸化的空载自连吗？ |
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