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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。
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1151529259

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。 已有6人参与

质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。。
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1楼 2014-09-05 10:58:09
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切不开的原因太多了~你用的是哪个公司的内切酶？酶切时间是否合适
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2楼2014-09-05 17:36:52
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1151529259

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-09-05 17:36:52
切不开的原因太多了~你用的是哪个公司的内切酶？酶切时间是否合适

Takara 公司的内切酶，酶切了3h
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3楼2014-09-05 20:43:08
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题的陈述太简单了，你要简单的说一下你的质粒，实验的protocol，这样我们才能帮你发现问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-09-07 23:06:38
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Virove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一种可能是两个酶切位点可能距离太近，不足以容纳两种内切酶之间的物理距离;还有一种可能是你选择酶切的位点是甲基化的位点，内切酶无法发挥作用。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-09-08 01:29:05
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1151529259 at 2014-09-05 20:43:08
Takara 公司的内切酶，酶切了3h...

takara的酶要选合适的buffer，用的是哪两种酶，一个都没切开吗
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6楼2014-09-08 09:05:31
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apollo5206

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要说下是哪两种酶？酶切时间和buffer我们才能帮你看看问题在哪

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-09-08 09:33:26
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)
双酶切不应该4个小时吗？？多切一会也没事的
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8楼2014-09-09 10:08:28
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匿名

用户注销 (著名写手)
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9楼2014-09-09 12:59:08
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

1151529259

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ncuduhan at 2014-09-07 23:06:38
问题的陈述太简单了，你要简单的说一下你的质粒，实验的protocol，这样我们才能帮你发现问题

质粒PET37b，酶切位点 NdeⅠ 和XhoⅠ...
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10楼2014-09-12 14:36:28
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