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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。
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1151529259

木虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by Virove at 2014-09-08 01:29:05
一种可能是两个酶切位点可能距离太近，不足以容纳两种内切酶之间的物理距离;还有一种可能是你选择酶切的位点是甲基化的位点，内切酶无法发挥作用。

距离应该不是问题。请问一下物理距离是多少呢？
  
我不知道酶切位点是不是甲基化位点，怎么确定？

谢谢大神帮忙。。。
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11楼2014-09-12 14:37:50
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1151529259

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-09-08 09:05:31
takara的酶要选合适的buffer，用的是哪两种酶，一个都没切开吗...

Buffer不是问题，用的NdeⅠ和XhoⅠ，不能确定是不是单酶切，质粒应该切了一刀，但是跑胶没有发现切下的片段。。。
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12楼2014-09-12 14:39:26
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1151529259

木虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by apollo5206 at 2014-09-08 09:33:26
你要说下是哪两种酶？酶切时间和buffer我们才能帮你看看问题在哪

takara公司的NdeⅠ和XhoⅠ两种内切酶，酶切时间3h，后来试过酶切过夜，buffer用的两个酶100%的10×H buffer,应该不是buffer的问题。。
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13楼2014-09-12 14:42:02
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1151529259

木虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-09-09 10:08:28
双酶切不应该4个小时吗？？多切一会也没事的

试过酶切过夜，可也没什么效果。
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14楼2014-09-12 14:42:24
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1151529259

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-09-09 12:59:08
takara的内切酶的说明书上有其使用时的注意事项，如切割效率受甘油、离子浓度、甲基化等影响，可以参考一下~

恩 我仔细看看 谢谢诶。。。
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15楼2014-09-12 14:42:47
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xuejia174

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
16楼2014-09-12 15:19:15
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