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1151529259

木虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by Virove at 2014-09-08 01:29:05
一种可能是两个酶切位点可能距离太近,不足以容纳两种内切酶之间的物理距离;还有一种可能是你选择酶切的位点是甲基化的位点,内切酶无法发挥作用。

距离应该不是问题。请问一下物理距离是多少呢?
  
我不知道酶切位点是不是甲基化位点,怎么确定?

谢谢大神帮忙。。。
11楼2014-09-12 14:37:50
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1151529259

木虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-09-08 09:05:31
takara的酶要选合适的buffer,用的是哪两种酶,一个都没切开吗...

Buffer不是问题,用的NdeⅠ和XhoⅠ,不能确定是不是单酶切,质粒应该切了一刀,但是跑胶没有发现切下的片段。。。
12楼2014-09-12 14:39:26
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1151529259

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by apollo5206 at 2014-09-08 09:33:26
你要说下是哪两种酶?酶切时间和buffer我们才能帮你看看问题在哪

takara公司的NdeⅠ和XhoⅠ两种内切酶,酶切时间3h,后来试过酶切过夜,buffer用的两个酶100%的10×H buffer,应该不是buffer的问题。。
13楼2014-09-12 14:42:02
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木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-09-09 10:08:28
双酶切不应该4个小时吗??多切一会也没事的

试过酶切过夜,可也没什么效果。
14楼2014-09-12 14:42:24
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木虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-09-09 12:59:08
takara的内切酶的说明书上有其使用时的注意事项,如切割效率受甘油、离子浓度、甲基化等影响,可以参考一下~

恩 我仔细看看 谢谢诶。。。
15楼2014-09-12 14:42:47
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xuejia174

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

16楼2014-09-12 15:19:15
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