| 查看: 3440 | 回复: 25 | |||
[求助]
双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办 已有5人参与
|
|||
| 我刚刚开始做分子克隆，将双酶切的基因片段大约1600bp与相同双酶切的质粒进行连接，电泳显示两个片段都很亮，酶切反应37摄氏度，2小时。使用T4 连接酶进行16摄氏度过夜连接，设置了阳性对照（仅含空质粒），在含有抗性的平板上进行涂布，结果阳性对照组长出很多菌落，而实验组几乎不长菌落，长出的菌落进行菌落PCR得到的条带也不是我所期望的，请大家帮帮忙，看我哪里出现了问题。 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切连接的时候三个片段自连
已经有15人回复
- 质粒提取后进行双酶切无目的基因
已经有13人回复
- 酶切连接连不上，要死了
已经有23人回复
- 目的基因是否从质粒上掉落下来
已经有4人回复
- 一个关于酶切后质粒载体构建的问题
已经有6人回复
- 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？
已经有7人回复
- 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因
已经有20人回复
- 将目的基因连入表达质粒，酶切位点问题
已经有3人回复
- 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
已经有18人回复
- 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
已经有21人回复
- 克隆基因为什么一直连不到载体上
已经有11人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- PET-15b质粒连目的基因，一直连不进去，怎么办。
已经有5人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3101.7
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 187.5小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2014-09-01 16:33:31
2楼2014-09-01 16:28:04
wangranjun
荣誉版主 (知名作家)
广庭之惘然
-
专家经验: +106 - 应助: 108 (高中生)
- 贵宾: 2.351
- 金币: 33457.9
- 散金: 3850
- 红花: 153
- 沙发: 8
- 帖子: 5316
- 在线: 1310.2小时
- 虫号: 2234819
- 注册: 2013-01-11
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
- 管辖: 文学芳草园
4楼2014-09-01 17:17:45
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
11楼2014-09-02 18:45:56
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
20楼2014-09-03 09:38:50
wangtailin
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 456.1
- 散金: 12
- 帖子: 56
- 在线: 161.1小时
- 虫号: 1532435
- 注册: 2011-12-11
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2014-09-01 18:57:41
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
6楼2014-09-01 19:12:21
Crocodile-YK
木虫 (正式写手)
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 5191.2
- 红花: 3
- 帖子: 998
- 在线: 119.9小时
- 虫号: 1126300
- 注册: 2010-10-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2014-09-01 19:55:17
8楼2014-09-02 08:48:05
111111111118
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 138.4
- 散金: 79
- 红花: 10
- 帖子: 348
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 1960805
- 注册: 2012-08-28
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:39:33
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:39:33
|
你好， 可以参考一下这个帖子： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7727916 |
9楼2014-09-02 13:41:45
10楼2014-09-02 18:08:41
10