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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-02 18:08:41
质粒的亮度与marker最高亮度的条带差不多，在20微升里加入5~8微升，这个使用量算很多吗？...

那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-09-02 18:45:56
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jemir12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2014-09-02 18:56:43
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匿名

用户注销 (正式写手)

钻石
本帖仅楼主可见
13楼2014-09-02 19:25:53
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-01 16:33:31
载体加20*载体大小/（1000*浓度）ul
片段加100*片段大小/（1000*浓度）ul
再加酶，buffer，水，体系10ul。
16度过夜。
试试

亲，我4度过夜，影响大吗
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踏实
14楼2014-09-02 20:40:29
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-02 18:45:56
那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。
...

你好，我想问你，如何使酶切之后回收的浓度高一点，我回收的效率太低了
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踏实
15楼2014-09-02 20:46:47
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
你用什么方法回收的？其实不管怎样，最终溶解的时候少加些水不就浓度高了吗？我都是这么搞的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-09-02 22:22:28
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sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-02 18:45:56
那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。
...

我的marker 最高亮度的条带DNA含量为20ng/uL，做连接时不是需要50~100ng吗，所以我在20微升里加入5~8uL，这样也多吗
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17楼2014-09-03 08:49:23
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sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mingjiayuwhu at 2014-09-02 19:25:53
直接打靶做得了

能说的详细一点吗，我不太明白，谢谢了
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18楼2014-09-03 08:51:46
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sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jemir12 at 2014-09-02 18:56:43
连个测浓度的一起都没有吗...

请问一般用什么仪器测浓度啊，测定时需要多少含量啊
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19楼2014-09-03 08:52:58
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-03 08:49:23
我的marker 最高亮度的条带DNA含量为20ng/uL，做连接时不是需要50~100ng吗，所以我在20微升里加入5~8uL，这样也多吗...

我没测过浓度，都是这么做的，也比较顺利。只是个参考，你可以尝试一下。祝你顺利！
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20楼2014-09-03 09:38:50
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