应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 3190  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-02 18:08:41
质粒的亮度与marker最高亮度的条带差不多，在20微升里加入5~8微升，这个使用量算很多吗？...

那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2014-09-02 18:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jemir12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2014-09-02 18:56:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

钻石
本帖仅楼主可见
13楼2014-09-02 19:25:53
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-01 16:33:31
载体加20*载体大小/（1000*浓度）ul
片段加100*片段大小/（1000*浓度）ul
再加酶，buffer，水，体系10ul。
16度过夜。
试试

亲，我4度过夜，影响大吗
赞一下 回复此楼
踏实
14楼2014-09-02 20:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-02 18:45:56
那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。
...

你好，我想问你，如何使酶切之后回收的浓度高一点，我回收的效率太低了
赞一下 回复此楼
踏实
15楼2014-09-02 20:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
你用什么方法回收的？其实不管怎样，最终溶解的时候少加些水不就浓度高了吗？我都是这么搞的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
16楼2014-09-02 22:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-02 18:45:56
那肯定是多了，我做连接10微升体系一般1微升，浓度高就加0.5微升或者更低。
...

我的marker 最高亮度的条带DNA含量为20ng/uL，做连接时不是需要50~100ng吗，所以我在20微升里加入5~8uL，这样也多吗
赞一下 回复此楼
17楼2014-09-03 08:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mingjiayuwhu at 2014-09-02 19:25:53
直接打靶做得了

能说的详细一点吗，我不太明白，谢谢了
赞一下 回复此楼
18楼2014-09-03 08:51:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jemir12 at 2014-09-02 18:56:43
连个测浓度的一起都没有吗...

请问一般用什么仪器测浓度啊，测定时需要多少含量啊
赞一下 回复此楼
19楼2014-09-03 08:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-03 08:49:23
我的marker 最高亮度的条带DNA含量为20ng/uL，做连接时不是需要50~100ng吗，所以我在20微升里加入5~8uL，这样也多吗...

我没测过浓度，都是这么做的，也比较顺利。只是个参考，你可以尝试一下。祝你顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2014-09-03 09:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunyu65045 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 oepdf5z972 2026-06-20 3/150 2026-06-21 21:01 by zo4669e5n4
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭