双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办 - 分子生物 - DNA重组

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sunyu65045

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20楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-03 09:38:50
我没测过浓度，都是这么做的，也比较顺利。只是个参考，你可以尝试一下。祝你顺利！...

还有个问题想请教您一下，我刚提取的质粒只有一条条带且与质粒开环状态大小一致，我的原始质粒里没有目的条带，双酶切质粒的大小跟没有经过酶切的质粒大小一样，这样的质粒还能继续使用吗，我一直连接不上是不是跟智力有关系？麻烦您了

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21楼2014-09-03 10:01:12

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bio_sci

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表达的蛋白是不是有毒，我也不清楚，如果是有毒，你要用bl21plyss菌株

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22楼2014-09-03 10:10:30

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sunyu65045

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22楼: Originally posted by bio_sci at 2014-09-03 10:10:30
表达的蛋白是不是有毒，我也不清楚，如果是有毒，你要用bl21plyss菌株

表达的蛋白没有毒，我提取的质粒是线性状态的，能用酶切开吗？

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23楼2014-09-03 10:52:44

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zhaodahe

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:39:10

引用回帖:

21楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-03 10:01:12
还有个问题想请教您一下，我刚提取的质粒只有一条条带且与质粒开环状态大小一致，我的原始质粒里没有目的条带，双酶切质粒的大小跟没有经过酶切的质粒大小一样，这样的质粒还能继续使用吗，我一直连接不上是不是跟 ...

我遇到比较多的情况，是刚提取跑电泳超螺旋和开环的质粒相对较多，提取的好的话超螺旋更多，而线性的很少几乎没有；如果质粒经双酶切，两个酶切位点很近，得到的质粒跟线性的大小差不多，你的结果是跟开环大小差不多，是不是酶切的问题或者别的。

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24楼2014-09-03 12:18:16

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