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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办
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sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-03 09:38:50
我没测过浓度，都是这么做的，也比较顺利。只是个参考，你可以尝试一下。祝你顺利！...

还有个问题想请教您一下，我刚提取的质粒只有一条条带且与质粒开环状态大小一致，我的原始质粒里没有目的条带，双酶切质粒的大小跟没有经过酶切的质粒大小一样，这样的质粒还能继续使用吗，我一直连接不上是不是跟智力有关系？麻烦您了
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21楼2014-09-03 10:01:12
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
表达的蛋白是不是有毒，我也不清楚，如果是有毒，你要用bl21plyss菌株

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22楼2014-09-03 10:10:30
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sunyu65045

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by bio_sci at 2014-09-03 10:10:30
表达的蛋白是不是有毒，我也不清楚，如果是有毒，你要用bl21plyss菌株

表达的蛋白没有毒，我提取的质粒是线性状态的，能用酶切开吗？
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23楼2014-09-03 10:52:44
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:39:10
引用回帖:
21楼: Originally posted by sunyu65045 at 2014-09-03 10:01:12
还有个问题想请教您一下，我刚提取的质粒只有一条条带且与质粒开环状态大小一致，我的原始质粒里没有目的条带，双酶切质粒的大小跟没有经过酶切的质粒大小一样，这样的质粒还能继续使用吗，我一直连接不上是不是跟 ...

我遇到比较多的情况，是刚提取跑电泳超螺旋和开环的质粒相对较多，提取的好的话超螺旋更多，而线性的很少几乎没有；如果质粒经双酶切，两个酶切位点很近，得到的质粒跟线性的大小差不多，你的结果是跟开环大小差不多，是不是酶切的问题或者别的。
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24楼2014-09-03 12:18:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:39:20
引用回帖:
14楼: Originally posted by hajierlove at 2014-09-02 20:40:29
亲，我4度过夜，影响大吗...

不大   但是我觉得时间应该长点
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25楼2014-09-04 08:50:34
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落叶的轨迹

金虫 (初入文坛)
选择的质粒合适么？我原来的实验只能连blunt，不能连T

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26楼2014-09-04 09:11:24
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