24小时热门版块排行榜    

查看: 3363  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sunyu65045

木虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办 已有5人参与

我刚刚开始做分子克隆,将双酶切的基因片段大约1600bp与相同双酶切的质粒进行连接,电泳显示两个片段都很亮,酶切反应37摄氏度,2小时。使用T4 连接酶进行16摄氏度过夜连接,设置了阳性对照(仅含空质粒),在含有抗性的平板上进行涂布,结果阳性对照组长出很多菌落,而实验组几乎不长菌落,长出的菌落进行菌落PCR得到的条带也不是我所期望的,请大家帮帮忙,看我哪里出现了问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

111111111118

银虫 (正式写手)


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:39:33
你好, 可以参考一下这个帖子:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7727916
9楼2014-09-02 13:41:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sunyu65045(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:21:24
刚开始连不上很正常。
1,连载体,片段与载体的比例非常重要。请依据跑胶时片段与载体的亮度,以及片段与载体的大小设计连接比例。
2,载体连接,运气成分占很大,看你人品了。
2楼2014-09-01 16:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sunyu65045(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:21:32
载体加20*载体大小/(1000*浓度)ul
片段加100*片段大小/(1000*浓度)ul
再加酶,buffer,水,体系10ul。
16度过夜。
试试
3楼2014-09-01 16:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sunyu65045(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:21:43
设计引物的时候要注意选择的酶切位点的酶切效率,有些酶的酶切效率低需要添加保护性碱基或者延长酶切时间……楼上的连接的优化条件已经很好了,可以尝试一下!祝顺利!
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
4楼2014-09-01 17:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见