24小时热门版块排行榜    

查看: 579  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kevin_pretty

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达菌液PCR 已有1人参与

求助: 用之前保存的原核表达菌株BL21,重组载体pet28,第一次能够p出目的条带(条带很清晰),之后做IPTG诱导表达,但是没有目的蛋白,然后用活化后的菌株重新摇菌,但是这次菌液PCR无目的条带,这是怎么回事?求解!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kevin_pretty

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-09 12:22:12
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主 ...

现在又遇到新问题了,活化的含有重组载体的菌株在1ml离心管中能P出条带,但是在转移到大瓶摇菌的时候就P不出来了,而且提质粒后PCR验证也没有条带!这是怎么回事???
3楼2014-09-17 09:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-09 19:37:19
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主可以提取质粒再PCR试一试!
2楼2014-09-09 12:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见