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kevin_pretty

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达菌液PCR 已有1人参与

求助: 用之前保存的原核表达菌株BL21,重组载体pet28,第一次能够p出目的条带(条带很清晰),之后做IPTG诱导表达,但是没有目的蛋白,然后用活化后的菌株重新摇菌,但是这次菌液PCR无目的条带,这是怎么回事?求解!!!
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-09 19:37:19
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主可以提取质粒再PCR试一试!
2楼2014-09-09 12:22:12
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kevin_pretty

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-09 12:22:12
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主 ...

现在又遇到新问题了,活化的含有重组载体的菌株在1ml离心管中能P出条带,但是在转移到大瓶摇菌的时候就P不出来了,而且提质粒后PCR验证也没有条带!这是怎么回事???
3楼2014-09-17 09:13:58
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