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pidou213

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[交流] 【求助/交流】酵母菌落PCR 已有8人参与

请问做毕赤酵母表达的虫友们：

如果在做菌落PCR的时候，不用Lyticase的话，完全按照最普通的预变性94度，2min；（94度，1min；55度，1min；72度，1min）30循环，72度，7min的话，能否成功菌落PCR?

[ Last edited by pidou213 on 2010-5-11 at 22:33 ]

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1楼 2010-05-11 00:14:53

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gaiyf

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pidou213(金币+1):谢谢你啊！ 2010-05-11 22:38:20

如果你是直接挑斑pcr的话可是试试在pcr之前先挑取少量的菌斑与30ul无菌水中，然后先液氮冷冻再沸水浴，如此反复三次，然后再取适量的冻容好的液体做模板，效果很好的

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多看文献，多学知识

5楼2010-05-11 12:00:22

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plantaqp

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预变性94度，10min, 再往后做就可以了

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3楼2010-05-11 11:27:03

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fungixx

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amisking(金币+3):不错！ 2010-05-11 11:46:41

试试这个吧

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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

4楼2010-05-11 11:41:04

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susizheng

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Originally posted by fungixx at 2010-05-11 11:41:04:

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请问10×菌落PCR缓冲液的成分是什么？

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Thank-you，so-blue.

6楼2010-05-11 20:55:20

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fungixx

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Originally posted by susizheng at 2010-05-11 20:55:20:

请问10×菌落PCR缓冲液的成分是什么？

图的最下面材料和溶液下面的：

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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

7楼2010-05-11 22:13:38

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pidou213

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好的，谢谢啦，主要是见到酵母表达手册上需要加入Lyticase，毕竟酵母的细胞很难破壁嘛！你怎么看呢？

引用回帖:

Originally posted by fungixx at 2010-05-11 11:41:04:

试试这个吧

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8楼2010-05-11 22:35:41

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pidou213

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酵母表达手册上是按照你的方法写的，可是我见到有的文献上却没有经过这个处理，因此我才觉得怪异

毕竟酵母的细胞壁很厚嘛，DNA应该很难扩出来啊

引用回帖:

Originally posted by gaiyf at 2010-05-11 12:00:22:
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9楼2010-05-11 22:38:00

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chenliangqiang

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我做过酵母的菌落pcr
你可以挑取少量菌体到ddH2O，中，涡旋2min，然后离心，取1ul作为模板应该就可以了。Tag酶最好用MIX

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笨宝宝

10楼2010-05-12 11:06:46

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