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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母菌落PCR
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母菌落PCR 已有8人参与

请问做毕赤酵母表达的虫友们：

如果在做菌落PCR的时候，不用Lyticase的话，完全按照最普通的预变性94度，2min；（94度，1min；55度，1min；72度，1min）30循环，72度，7min的话，能否成功菌落PCR?

[ Last edited by pidou213 on 2010-5-11 at 22:33 ]
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见得多爱的多
1楼 2010-05-11 00:14:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaiyf

金虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-11 19:40:53
pidou213(金币+1):谢谢你啊！ 2010-05-11 22:38:20
如果你是直接挑斑pcr的话可是试试在pcr之前先挑取少量的菌斑与30ul无菌水中，然后先液氮冷冻再沸水浴，如此反复三次，然后再取适量的冻容好的液体做模板，效果很好的
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多看文献，多学知识
5楼2010-05-11 12:00:22
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普通回帖

plantaqp

金虫 (正式写手)
301min？
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2楼2010-05-11 05:42:04
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jasco

木虫 (正式写手)
预变性94度，10min, 再往后做就可以了
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3楼2010-05-11 11:27:03
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
amisking(金币+3):不错！ 2010-05-11 11:46:41

试试这个吧
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-05-11 11:41:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-11 11:41:04:

试试这个吧

请问10×菌落PCR缓冲液的成分是什么？
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Thank-you，so-blue.
6楼2010-05-11 20:55:20
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-05-11 20:55:20:

请问10×菌落PCR缓冲液的成分是什么？

图的最下面材料和溶液下面的：
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-05-11 22:13:38
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pidou213

木虫 (正式写手)
好的，谢谢啦，主要是见到酵母表达手册上需要加入Lyticase，毕竟酵母的细胞很难破壁嘛！你怎么看呢？
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-11 11:41:04:

试试这个吧

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见得多爱的多
8楼2010-05-11 22:35:41
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pidou213

木虫 (正式写手)
酵母表达手册上是按照你的方法写的，可是我见到有的文献上却没有经过这个处理，因此我才觉得怪异

毕竟酵母的细胞壁很厚嘛，DNA应该很难扩出来 啊
引用回帖:
Originally posted by gaiyf at 2010-05-11 12:00:22:
如果你是直接挑斑pcr的话可是试试在pcr之前先挑取少量的菌斑与30ul无菌水中，然后先液氮冷冻再沸水浴，如此反复三次，然后再取适量的冻容好的液体做模板，效果很好的

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见得多爱的多
9楼2010-05-11 22:38:00
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chenliangqiang

金虫 (小有名气)
我做过酵母的菌落pcr
你可以挑取少量菌体到ddH2O，中，涡旋2min，然后离心，取1ul作为模板应该就可以了。Tag酶最好用MIX
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笨宝宝
10楼2010-05-12 11:06:46
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