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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母菌落PCR
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母菌落PCR已有8人参与

请问做毕赤酵母表达的虫友们：

如果在做菌落PCR的时候，不用Lyticase的话，完全按照最普通的预变性94度，2min；（94度，1min；55度，1min；72度，1min）30循环，72度，7min的话，能否成功菌落PCR?

[ Last edited by pidou213 on 2010-5-11 at 22:33 ]
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见得多爱的多
1楼2010-05-11 00:14:53
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pidou213

木虫 (正式写手)
好的，谢谢啦，主要是见到酵母表达手册上需要加入Lyticase，毕竟酵母的细胞很难破壁嘛！你怎么看呢？
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-11 11:41:04:

试试这个吧

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见得多爱的多
8楼2010-05-11 22:35:41
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pidou213

木虫 (正式写手)
酵母表达手册上是按照你的方法写的，可是我见到有的文献上却没有经过这个处理，因此我才觉得怪异

毕竟酵母的细胞壁很厚嘛，DNA应该很难扩出来 啊
引用回帖:
Originally posted by gaiyf at 2010-05-11 12:00:22:
如果你是直接挑斑pcr的话可是试试在pcr之前先挑取少量的菌斑与30ul无菌水中，然后先液氮冷冻再沸水浴，如此反复三次，然后再取适量的冻容好的液体做模板，效果很好的

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见得多爱的多
9楼2010-05-11 22:38:00
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pidou213

木虫 (正式写手)
酵母的壁很厚的啊！！不做特殊处理吗？》
引用回帖:
Originally posted by chenliangqiang at 2010-05-12 11:06:46:
我做过酵母的菌落pcr
你可以挑取少量菌体到ddH2O，中，涡旋2min，然后离心，取1ul作为模板应该就可以了。Tag酶最好用MIX

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见得多爱的多
11楼2010-05-12 11:21:53
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