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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于酵母菌落PCR 已有5人参与

不知道大家有没有做酵母表达的,基因是否转进去做PCR鉴定的时候,大家直接菌落PCR还是提取DNA后进行PCR??


我今天的菌落PCR又没有成功,好郁闷啊!!!!

反应程序:95,10min;(94,1min;55,1min;72,2min)30cycles,72,10min
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434744419

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-05-17 20:13:50
可以直接做菌落PCR  我做过 没什么问题  一次就P出来了 条件和原来的条件一样啊
2楼2010-05-17 20:01:45
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gaiyf

金虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 21:49:39
做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键,太多或者是太少都不行,这个方法在已经练熟了,有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是真菌,直接菌落pcr的效果肯定不如细菌的好,所以还是建议楼主先提DNA吧
多看文献,多学知识
3楼2010-05-17 20:14:54
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

原来的条件是什么意思??
引用回帖:
Originally posted by 434744419 at 2010-05-17 20:01:45:
可以直接做菌落PCR  我做过 没什么问题  一次就P出来了 条件和原来的条件一样啊

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4楼2010-05-18 16:44:28
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

您做菌落PCR的时候的效果怎么样?或者说成功率多大?
引用回帖:
Originally posted by gaiyf at 2010-05-17 20:14:54:
做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键,太多或者是太少都不行,这个方法在已经练熟了,有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是 ...

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5楼2010-05-18 16:45:15
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gaiyf

金虫 (正式写手)


plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-19 04:48:33
我们做菌落pcr时主要是针对细菌的。做真菌的一般还是要提dna的
多看文献,多学知识
6楼2010-05-18 20:17:34
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王雨云

金虫 (小有名气)


plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-19 04:48:42
做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧,不一定要提DNA,然后再用处理后的菌体做PCR
7楼2010-05-18 20:50:25
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

怎么处理呢?
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-05-18 20:50:25:
做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧,不一定要提DNA,然后再用处理后的菌体做PCR

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8楼2010-05-18 22:57:06
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cheo163

金虫 (小有名气)

我有做过菌落pcr是阴性的,但是挑克隆接种,做小样表达后的结果是对的(wb检测,蛋白大小跟预期的一样)。建议在菌落pcr时加些甘油等增强剂试一下。
9楼2010-05-19 08:53:15
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