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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酵母菌落PCR
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于酵母菌落PCR 已有5人参与

不知道大家有没有做酵母表达的，基因是否转进去做PCR鉴定的时候，大家直接菌落PCR还是提取DNA后进行PCR？？


我今天的菌落PCR又没有成功，好郁闷啊！！！！

反应程序：95，10min；（94，1min；55，1min；72，2min）30cycles，72，10min
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1楼 2010-05-17 19:41:27
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434744419

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-05-17 20:13:50
可以直接做菌落PCR  我做过 没什么问题  一次就P出来了 条件和原来的条件一样啊
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2楼2010-05-17 20:01:45
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 21:49:39
做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键，太多或者是太少都不行，这个方法在已经练熟了，有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是真菌，直接菌落pcr的效果肯定不如细菌的好，所以还是建议楼主先提DNA吧
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多看文献，多学知识
3楼2010-05-17 20:14:54
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
原来的条件是什么意思？？
引用回帖:
Originally posted by 434744419 at 2010-05-17 20:01:45:
可以直接做菌落PCR  我做过 没什么问题  一次就P出来了 条件和原来的条件一样啊

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4楼2010-05-18 16:44:28
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
您做菌落PCR的时候的效果怎么样？或者说成功率多大？
引用回帖:
Originally posted by gaiyf at 2010-05-17 20:14:54:
做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键，太多或者是太少都不行，这个方法在已经练熟了，有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是 ...

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5楼2010-05-18 16:45:15
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-19 04:48:33
我们做菌落pcr时主要是针对细菌的。做真菌的一般还是要提dna的
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多看文献，多学知识
6楼2010-05-18 20:17:34
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王雨云

金虫 (小有名气)
★
plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-19 04:48:42
做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧，不一定要提DNA，然后再用处理后的菌体做PCR
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7楼2010-05-18 20:50:25
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
怎么处理呢？
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-05-18 20:50:25:
做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧，不一定要提DNA，然后再用处理后的菌体做PCR

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8楼2010-05-18 22:57:06
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cheo163

金虫 (小有名气)
我有做过菌落pcr是阴性的，但是挑克隆接种，做小样表达后的结果是对的（wb检测，蛋白大小跟预期的一样）。建议在菌落pcr时加些甘油等增强剂试一下。
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9楼2010-05-19 08:53:15
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