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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 原核表达菌液PCR
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kevin_pretty

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达菌液PCR 已有1人参与

求助： 用之前保存的原核表达菌株BL21，重组载体pet28，第一次能够p出目的条带（条带很清晰），之后做IPTG诱导表达，但是没有目的蛋白，然后用活化后的菌株重新摇菌，但是这次菌液PCR无目的条带，这是怎么回事？求解！！！
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1楼 2014-09-09 11:18:43
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-09 19:37:19
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主可以提取质粒再PCR试一试！
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2楼2014-09-09 12:22:12
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kevin_pretty

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-09 12:22:12
楼主第一次能够扩出来表明有目的基因,诱导没有目的蛋白,可能是序列不对或者你的目的蛋白在BL21菌里面表达不完整或者不表达或则表达后被降解,可能性挺多的.第二次没有扩出来有可能是菌株被污染了或菌液浓度不够,楼主 ...

现在又遇到新问题了，活化的含有重组载体的菌株在1ml离心管中能P出条带，但是在转移到大瓶摇菌的时候就P不出来了，而且提质粒后PCR验证也没有条带！这是怎么回事？？？
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3楼2014-09-17 09:13:58
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