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raohuihua

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切后没有条带了。。。。 已有3人参与

向别人要了个质粒,然后我自己转化大肠DH5a,提出来的质粒和别人给的不一样,我用酶切鉴定后跑胶啥都没有,不管是单酶切还是双酶切都一样,别人给的那个质粒我酶切验证过是对的,难道感受态的原因?但是我之前用这个感受态转化其它的质粒也是可以的啊,好困惑求各位大侠指导
第一张图片前面3个是我提出来的质粒,最后一个是别人给的质粒;
第二章2,4是酶切的结果

质粒酶切后没有条带了。。。。
IMG_20140904_204120.jpg


质粒酶切后没有条带了。。。。-1
IMG_20140904_204146.jpg
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。
2楼2014-09-05 15:25:27
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 15:25:27
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。

已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的
3楼2014-09-05 16:30:56
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-05 16:30:56
已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的...

酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。
4楼2014-09-05 18:18:33
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-05 21:33:23
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:57:05
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-09-05 18:38:00
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gastrodia

金虫 (正式写手)

有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了
6楼2014-09-05 22:47:43
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zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:56:40
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:57:03
第一,检查酶切位点是否正确,一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二,所提质粒酶切用了多少微升,多少纳克的量?是不是太少了?
第三,酶切了多久?酶切温度和说明书上的一致吗?
第四,反复对照检查实验中每个步骤,看看是不是哪里加错样品了什么的。
7楼2014-09-05 23:01:31
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 18:18:33
酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。...

用的是TAKARA的快酶,切了45min
8楼2014-09-06 09:46:44
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-05 18:38:00
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

单酶切和双酶切都试过了,用原始的质粒也做了阳性对照,原始的质粒切出来了,其它的都没有
9楼2014-09-06 09:48:05
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2014-09-05 22:47:43
有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了

我是用生工的试剂盒提取的,一直都是用这个,以前也没有发现类似的问题,倒是有几次提出来的质粒有好多条带
10楼2014-09-06 09:49:13
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