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raohuihua

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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帖子: 95
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虫号: 2626338
注册: 2013-08-31
专业: 病原微生物变异与耐药

引用回帖:

7楼: Originally posted by zeroon at 2014-09-05 23:01:31
第一，检查酶切位点是否正确，一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二，所提质粒酶切用了多少微升，多少纳克的量？是不是太少了？
第三，酶切了多久？酶切温度和说明书上的一致吗？
第四，反复对照检查实验 ...

图谱是有的，酶切位点也是对的，温度也看了没错，酶切体系：质粒4ul，单酶1ul，buffer1ul，ddw4ul，37°C 40min，多少纳克不清楚，就是依据图片上的亮度估计的，然后切完后加了8ul进去跑电泳，酶切已经做了很多次了，应该不存在加样的问题

11楼2014-09-06 09:53:22

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zhaodahe

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
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专业: 微生物遗传学

【答案】应助回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-06 09:48:05
单酶切和双酶切都试过了，用原始的质粒也做了阳性对照，原始的质粒切出来了，其它的都没有...

阳性对照有电泳图吗？我的意思是你换个其他内切酶试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

12楼2014-09-06 10:23:07

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miaoshuang

银虫 (小有名气)

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专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

试剂盒是不是有问题？换一个试试

努力，勇敢向前走，一切皆有可能

13楼2014-09-08 11:10:09

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