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raohuihua

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切后没有条带了。。。。 已有3人参与

向别人要了个质粒,然后我自己转化大肠DH5a,提出来的质粒和别人给的不一样,我用酶切鉴定后跑胶啥都没有,不管是单酶切还是双酶切都一样,别人给的那个质粒我酶切验证过是对的,难道感受态的原因?但是我之前用这个感受态转化其它的质粒也是可以的啊,好困惑求各位大侠指导
第一张图片前面3个是我提出来的质粒,最后一个是别人给的质粒;
第二章2,4是酶切的结果

质粒酶切后没有条带了。。。。
IMG_20140904_204120.jpg


质粒酶切后没有条带了。。。。-1
IMG_20140904_204146.jpg
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zeroon at 2014-09-05 23:01:31
第一,检查酶切位点是否正确,一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二,所提质粒酶切用了多少微升,多少纳克的量?是不是太少了?
第三,酶切了多久?酶切温度和说明书上的一致吗?
第四,反复对照检查实验 ...

图谱是有的,酶切位点也是对的,温度也看了没错,酶切体系:质粒4ul,单酶1ul,buffer1ul,ddw4ul,37°C 40min,多少纳克不清楚,就是依据图片上的亮度估计的,然后切完后加了8ul进去跑电泳,酶切已经做了很多次了,应该不存在加样的问题
11楼2014-09-06 09:53:22
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。
2楼2014-09-05 15:25:27
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raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 15:25:27
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。

已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的
3楼2014-09-05 16:30:56
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-05 16:30:56
已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的...

酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。
4楼2014-09-05 18:18:33
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