24小时热门版块排行榜    

查看: 7650  |  回复: 12

raohuihua

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切后没有条带了。。。。 已有3人参与

向别人要了个质粒,然后我自己转化大肠DH5a,提出来的质粒和别人给的不一样,我用酶切鉴定后跑胶啥都没有,不管是单酶切还是双酶切都一样,别人给的那个质粒我酶切验证过是对的,难道感受态的原因?但是我之前用这个感受态转化其它的质粒也是可以的啊,好困惑求各位大侠指导
第一张图片前面3个是我提出来的质粒,最后一个是别人给的质粒;
第二章2,4是酶切的结果

质粒酶切后没有条带了。。。。
IMG_20140904_204120.jpg


质粒酶切后没有条带了。。。。-1
IMG_20140904_204146.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。
2楼2014-09-05 15:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 15:25:27
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。

已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的
3楼2014-09-05 16:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-05 16:30:56
已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的...

酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。
4楼2014-09-05 18:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-05 21:33:23
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:57:05
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-09-05 18:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了
6楼2014-09-05 22:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:56:40
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:57:03
第一,检查酶切位点是否正确,一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二,所提质粒酶切用了多少微升,多少纳克的量?是不是太少了?
第三,酶切了多久?酶切温度和说明书上的一致吗?
第四,反复对照检查实验中每个步骤,看看是不是哪里加错样品了什么的。
7楼2014-09-05 23:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 18:18:33
酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。...

用的是TAKARA的快酶,切了45min
8楼2014-09-06 09:46:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-05 18:38:00
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

单酶切和双酶切都试过了,用原始的质粒也做了阳性对照,原始的质粒切出来了,其它的都没有
9楼2014-09-06 09:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2014-09-05 22:47:43
有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了

我是用生工的试剂盒提取的,一直都是用这个,以前也没有发现类似的问题,倒是有几次提出来的质粒有好多条带
10楼2014-09-06 09:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 raohuihua 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +5 vv迷 2026-03-22 5/250 2026-03-23 07:36 by Iveryant
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
信息提示
请填处理意见