24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 7689  |  回复: 12

raohuihua

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切后没有条带了。。。。 已有3人参与

向别人要了个质粒,然后我自己转化大肠DH5a,提出来的质粒和别人给的不一样,我用酶切鉴定后跑胶啥都没有,不管是单酶切还是双酶切都一样,别人给的那个质粒我酶切验证过是对的,难道感受态的原因?但是我之前用这个感受态转化其它的质粒也是可以的啊,好困惑求各位大侠指导
第一张图片前面3个是我提出来的质粒,最后一个是别人给的质粒;
第二章2,4是酶切的结果

质粒酶切后没有条带了。。。。
IMG_20140904_204120.jpg


质粒酶切后没有条带了。。。。-1
IMG_20140904_204146.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。
2楼2014-09-05 15:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 15:25:27
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。

已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的
3楼2014-09-05 16:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-05 16:30:56
已经检测过了,单酶切和双酶切都是对的...

酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。
4楼2014-09-05 18:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-05 21:33:23
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:57:05
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-09-05 18:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了
6楼2014-09-05 22:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
raohuihua: 金币+2, 有帮助 2014-09-06 09:56:40
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:57:03
第一,检查酶切位点是否正确,一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二,所提质粒酶切用了多少微升,多少纳克的量?是不是太少了?
第三,酶切了多久?酶切温度和说明书上的一致吗?
第四,反复对照检查实验中每个步骤,看看是不是哪里加错样品了什么的。
7楼2014-09-05 23:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 18:18:33
酶切了多久?不会是产生星号活性全部切没了吧?你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。...

用的是TAKARA的快酶,切了45min
8楼2014-09-06 09:46:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-05 18:38:00
多换几个酶切,做个不加酶的阴性对照,看看啥情况。

单酶切和双酶切都试过了,用原始的质粒也做了阳性对照,原始的质粒切出来了,其它的都没有
9楼2014-09-06 09:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raohuihua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2014-09-05 22:47:43
有无考虑到你提的质粒不纯,夹杂着核酸酶,在质粒产量不高的情况下,37度温育降解了

我是用生工的试剂盒提取的,一直都是用这个,以前也没有发现类似的问题,倒是有几次提出来的质粒有好多条带
10楼2014-09-06 09:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 raohuihua 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 271求调剂 +34 2261744733 2026-04-11 40/2000 2026-04-13 23:15 by pies112
[考研] 考研求调剂 +11 子木呐 2026-04-12 12/600 2026-04-13 21:28 by 学员JpLReM
[考研] 366求调剂 +9 不知名的小卅 2026-04-11 9/450 2026-04-13 01:19 by 幸免 ..
[考研] 药学305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-10 8/400 2026-04-12 00:07 by zhouwenxian
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 282,求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 5/250 2026-04-10 10:22 by Evan_Liu
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 机械专硕273请求调剂 +6 庚申壬申 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:41 by bljnqdcc
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见