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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切后没有条带了。。。。
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raohuihua

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切后没有条带了。。。。 已有3人参与

向别人要了个质粒，然后我自己转化大肠DH5a，提出来的质粒和别人给的不一样，我用酶切鉴定后跑胶啥都没有，不管是单酶切还是双酶切都一样，别人给的那个质粒我酶切验证过是对的，难道感受态的原因？但是我之前用这个感受态转化其它的质粒也是可以的啊，好困惑求各位大侠指导
第一张图片前面3个是我提出来的质粒，最后一个是别人给的质粒；
第二章2，4是酶切的结果

质粒酶切后没有条带了。。。。
IMG_20140904_204120.jpg


质粒酶切后没有条带了。。。。-1
IMG_20140904_204146.jpg
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1楼 2014-09-05 13:06:58
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。
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。
2楼2014-09-05 15:25:27
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raohuihua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 15:25:27
你应该检测下人家给你的那管质粒有没有降解。

已经检测过了，单酶切和双酶切都是对的
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3楼2014-09-05 16:30:56
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by raohuihua at 2014-09-05 16:30:56
已经检测过了，单酶切和双酶切都是对的...

酶切了多久？不会是产生星号活性全部切没了吧？你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。
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。
4楼2014-09-05 18:18:33
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
raohuihua(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-05 21:33:23
raohuihua: 金币+2, ★有帮助 2014-09-06 09:57:05
多换几个酶切，做个不加酶的阴性对照，看看啥情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-09-05 18:38:00
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gastrodia

金虫 (正式写手)
有无考虑到你提的质粒不纯，夹杂着核酸酶，在质粒产量不高的情况下，37度温育降解了
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6楼2014-09-05 22:47:43
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zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
raohuihua: 金币+2, ★有帮助 2014-09-06 09:56:40
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:57:03
第一，检查酶切位点是否正确，一定要有和别人给的质粒对应的序列图谱。
第二，所提质粒酶切用了多少微升，多少纳克的量？是不是太少了？
第三，酶切了多久？酶切温度和说明书上的一致吗？
第四，反复对照检查实验中每个步骤，看看是不是哪里加错样品了什么的。
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7楼2014-09-05 23:01:31
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raohuihua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-05 18:18:33
酶切了多久？不会是产生星号活性全部切没了吧？你试下酶切1-2个小时再点一点样品看下。...

用的是TAKARA的快酶，切了45min
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8楼2014-09-06 09:46:44
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raohuihua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-05 18:38:00
多换几个酶切，做个不加酶的阴性对照，看看啥情况。

单酶切和双酶切都试过了，用原始的质粒也做了阳性对照，原始的质粒切出来了，其它的都没有
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9楼2014-09-06 09:48:05
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raohuihua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2014-09-05 22:47:43
有无考虑到你提的质粒不纯，夹杂着核酸酶，在质粒产量不高的情况下，37度温育降解了

我是用生工的试剂盒提取的，一直都是用这个，以前也没有发现类似的问题，倒是有几次提出来的质粒有好多条带
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10楼2014-09-06 09:49:13
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