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lmc2537

铜虫 (小有名气)

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[求助] 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关已有2人参与

初学QPCR，请大家多多指教，已经问过实验室的师兄了，不过依然有一些问题，还是不明白，
师兄说溶解曲线里是看不出引物二聚体峰的，但是我的空白对照三复孔之一出现了一个峰，我怀疑是引物二聚体峰。最后希望大家帮我分析下，我这个引物能用吗？或者如何改变PCR条件？在此谢谢木虫的朋友们了！
附图如下：

扩增曲线

扩增效率图

模板10倍稀释溶解曲线峰

模板100倍稀释溶解曲线峰

模板1000倍稀释溶解曲线峰

模板10000倍稀释溶解曲线峰

空白对照溶解曲线峰

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1楼 2014-09-02 10:59:15

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呆的呆

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-03 17:53:48
lmc2537: 金币+16 2014-09-29 20:26:25

楼主你好，我最近也在学习qpcr，昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。从数值上来看你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我的电脑只看到了模板稀释10倍的溶解曲线，只有一个主峰，应该没有引物二聚体的出现，你可以把做过qpcr的反应在电泳上跑下看看，是不是一条条带。。
我也是初学者，第一次回帖帮别人，希望能对你游泳呀！

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小虾米和不倒翁

2楼2014-09-02 21:56:13

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lmc2537

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 呆的呆 at 2014-09-02 21:56:13
楼主你好，我最近也在学习qpcr，昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。从数值上来看你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我 ...

谢谢你的耐心解答！

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3楼2014-09-03 17:53:33

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