应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
51/1返回列表
查看: 3822  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关 已有2人参与

初学QPCR，请大家多多指教，已经问过实验室的师兄了，不过依然有一些问题，还是不明白，
师兄说溶解曲线里是看不出引物二聚体峰的，但是我的空白对照三复孔之一出现了一个峰，我怀疑是引物二聚体峰。最后希望大家帮我分析下，我这个引物能用吗？或者如何改变PCR条件？在此谢谢木虫的朋友们了！
附图如下：

求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
扩增曲线


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-1
扩增效率图


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-2
模板10倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-3
模板100倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-4
模板1000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-5
模板10000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-6
空白对照溶解曲线峰
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-02 10:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呆的呆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-03 17:53:48
lmc2537: 金币+16 2014-09-29 20:26:25
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我的电脑只看到了模板稀释10倍的溶解曲线，只有一个主峰，应该没有引物二聚体的出现，你可以把做过qpcr的反应在电泳上跑下看看，是不是一条条带。。
我也是初学者，第一次回帖帮别人，希望能对你游泳呀！
赞一下(1人) 回复此楼
小虾米和不倒翁
2楼2014-09-02 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 呆的呆 at 2014-09-02 21:56:13
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我 ...

谢谢你的耐心解答！
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-03 17:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+2 2014-09-04 14:49:06
lmc2537: 金币+2 2014-09-29 20:26:30
不是引物二聚体，是非特异性扩增带
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-04 11:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-04 11:28:04
不是引物二聚体，是非特异性扩增带

那为什么我跑胶没看到非特异条带啊，只有最下方100bp以下的引物二聚体，且空白对照也有一个孔有峰。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-04 14:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lmc2537 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +29 医学老男孩 2026-08-13 61/3050 2026-08-15 20:41 by cqbnu
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +8 majunge000 2026-08-11 10/500 2026-08-15 18:55 by Equinoxhua
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭