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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何减少引物二聚体
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何减少引物二聚体

各位高手，这几天我做的PCR，目的条带很弱，但是引物二聚体很强，各位高手有没有能有效的减少引物二聚体的方法？我试着减少了引物的用量，但引物二聚体还是很强。郁闷，求各位高手指点！
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-07-28 11:57:54
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回帖置顶 ( 共有1个 )

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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1949stone: 回帖置顶 2013-07-29 10:38:26
1949stone: 目的很重要 2013-07-29 10:38:43
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-29 10:47:18
楼主问错了方向，我觉得你的问题不在于引物二聚体，而是如何成功PCR，如何特异扩增目标片段，重新检查你的引物设计有没有问题，检查你的反应体系是否都合理，如各个组分浓度在理想范围，成功PCR，二聚体条带自然弱了
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越学越无知
8楼2013-07-28 19:20:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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崔永霞(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:01:53
引物二聚体的减少主要是在设计引物 的时候解决的，设计的时候尽量避免回文结构，发夹结构等。。。
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2楼2013-07-28 12:36:59
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07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:02:11
崔永霞: 金币+1, ★有帮助 2013-07-28 18:25:25
给你篇文献自己看下
Brownie J, Shawcross S, Theaker J, Whitcombe D, Ferrie R, Newton C, Little S. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR. Nucleic Acids Res 1997; 25:3235-3241
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4楼2013-07-28 15:16:27
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figmeiling

新虫 (初入文坛)
★
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-29 10:47:45
适当的提高几度退火温度。我自己设计的引物，进行PCR扩增时也这样，后来我把做了梯度PCR，适当的提高了3度，二聚体减少了挺多的。
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12楼2013-07-29 09:01:15
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普通回帖

宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:02:03
引物二聚体，多是由引物有太多的自身配对或者交叉配对引起的，同时引物和模板的比率太高也能引起引物二聚体的发生，反应体系需进一步优化。
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让自己变得更强
3楼2013-07-28 14:58:50
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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崔永霞: 金币+1, ★有帮助 2013-07-28 17:25:17
PCR条带很弱有时候不一定是引物二聚体引起的，引物二聚体的出现恰恰是由于没有PCR扩增，引物没有消耗，跑胶出现引物条带
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-28 17:14:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-28 17:14:11
PCR条带很弱有时候不一定是引物二聚体引起的，引物二聚体的出现恰恰是由于没有PCR扩增，引物没有消耗，跑胶出现引物条带

那有没有什么解决的办法？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
6楼2013-07-28 17:25:35
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-29 10:47:05
可以做下退火温度梯度啊  多加点模板什么的
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7楼2013-07-28 19:19:01
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86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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1949stone: 金币+1, 也许有 2013-07-29 10:38:19
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-07-29 10:47:24
还可能tm值偏低，导致引物大量形成了二聚体，提高一下温度试试，我也曾经碰到过类似的问题，希望对你有所帮助
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9楼2013-07-28 19:59:39
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duanepp

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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1949stone: 金币+1, 同意 2013-07-29 10:38:08
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-29 10:47:34
PCR结果中二聚体亮，说明你的pcr不成功，不一定是引物的问题，有可能是你的体系或者是程序不适合你的PCR，所以要从这些来检查。
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10楼2013-07-29 08:18:42
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