24小时热门版块排行榜    

查看: 3276  |  回复: 21

崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何减少引物二聚体

各位高手,这几天我做的PCR,目的条带很弱,但是引物二聚体很强,各位高手有没有能有效的减少引物二聚体的方法?我试着减少了引物的用量,但引物二聚体还是很强。郁闷,求各位高手指点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:01:53
引物二聚体的减少主要是在设计引物 的时候解决的,设计的时候尽量避免回文结构,发夹结构等。。。
2楼2013-07-28 12:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:02:11
崔永霞: 金币+1, 有帮助 2013-07-28 18:25:25
给你篇文献自己看下
Brownie J, Shawcross S, Theaker J, Whitcombe D, Ferrie R, Newton C, Little S. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR. Nucleic Acids Res 1997; 25:3235-3241
4楼2013-07-28 15:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-07-29 10:38:26
1949stone: 目的很重要 2013-07-29 10:38:43
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励应助! 2013-07-29 10:47:18
楼主问错了方向,我觉得你的问题不在于引物二聚体,而是如何成功PCR,如何特异扩增目标片段,重新检查你的引物设计有没有问题,检查你的反应体系是否都合理,如各个组分浓度在理想范围,成功PCR,二聚体条带自然弱了
越学越无知
8楼2013-07-28 19:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figmeiling

新虫 (初入文坛)


崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-29 10:47:45
适当的提高几度退火温度。我自己设计的引物,进行PCR扩增时也这样,后来我把做了梯度PCR,适当的提高了3度,二聚体减少了挺多的。
12楼2013-07-29 09:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:02:03
引物二聚体,多是由引物有太多的自身配对或者交叉配对引起的,同时引物和模板的比率太高也能引起引物二聚体的发生,反应体系需进一步优化。
让自己变得更强
3楼2013-07-28 14:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+1, 有帮助 2013-07-28 17:25:17
PCR条带很弱有时候不一定是引物二聚体引起的,引物二聚体的出现恰恰是由于没有PCR扩增,引物没有消耗,跑胶出现引物条带
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-28 17:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-28 17:14:11
PCR条带很弱有时候不一定是引物二聚体引起的,引物二聚体的出现恰恰是由于没有PCR扩增,引物没有消耗,跑胶出现引物条带

那有没有什么解决的办法?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
6楼2013-07-28 17:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-29 10:47:05
可以做下退火温度梯度啊  多加点模板什么的
7楼2013-07-28 19:19:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 也许有 2013-07-29 10:38:19
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-07-29 10:47:24
还可能tm值偏低,导致引物大量形成了二聚体,提高一下温度试试,我也曾经碰到过类似的问题,希望对你有所帮助
9楼2013-07-28 19:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duanepp

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 同意 2013-07-29 10:38:08
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-29 10:47:34
PCR结果中二聚体亮,说明你的pcr不成功,不一定是引物的问题,有可能是你的体系或者是程序不适合你的PCR,所以要从这些来检查。
10楼2013-07-29 08:18:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 崔永霞 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 11/550 2026-09-03 18:42 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 10/500 2026-09-03 16:27 by T0rGB46095mJ
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 14:48 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +8 gdd2018 2026-08-28 13/650 2026-09-03 06:22 by 羽毛枫f
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-03 03:14 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
信息提示
请填处理意见