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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-29 10:48:02
楼主可以把退火温度提高,可以做个降落PCR试试。。。
keepon
11楼2013-07-29 09:01:00
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figmeiling

新虫 (初入文坛)


崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-29 10:47:45
适当的提高几度退火温度。我自己设计的引物,进行PCR扩增时也这样,后来我把做了梯度PCR,适当的提高了3度,二聚体减少了挺多的。
12楼2013-07-29 09:01:15
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-29 10:47:52
如果提高退火温度引物二聚体仍然有的话建议直接重新设计引物,尤其注意引物3'末端不要有互补碱基。
13楼2013-07-29 09:43:36
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 07bio at 2013-07-28 15:16:27
给你篇文献自己看下
Brownie J, Shawcross S, Theaker J, Whitcombe D, Ferrie R, Newton C, Little S. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR. Nucleic Acids Res 1997; 25:3235-3241

这位仁兄,你说的这篇文献你看懂了吗?能不能帮我解释下这是中什么样的方法?我没怎么看懂。。。麻烦了。。。
keepon
14楼2013-07-29 09:44:00
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小乖_1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物的时候,两条引物的3‘端最好不要有结合位点。
走自己的路,让别人羡慕嫉妒恨去吧!!!
15楼2013-07-29 09:52:46
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小乖_1990 at 2013-07-29 09:52:46
设计引物的时候,两条引物的3‘端最好不要有结合位点。

哦,非常感谢!
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
16楼2013-07-29 17:06:37
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07bio

木虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-07-29 09:44:00
这位仁兄,你说的这篇文献你看懂了吗?能不能帮我解释下这是中什么样的方法?我没怎么看懂。。。麻烦了。。。...

大意是描述一种方法,可以消除引物二聚体的积累
These observations led to the hypothesis that a system could be developed whereby the accumulation of PDs in a PCR may be eliminated
具体方法是在引物的5‘端加入一段寡核苷酸序列
We demonstrate a method for the general suppression of PD formation that uses a sequence of additional nucleotides (a Tail) at the 5′ ends of amplimers.
文章太长,不可能帮你翻译,自己看吧。
另外,针对你的问题可以先用高浓度的模板做看看,不行再做退火梯度。
引物该怎么设计,这个网上一搜一大堆。
17楼2013-07-29 17:08:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-07-29 09:01:00
楼主可以把退火温度提高,可以做个降落PCR试试。。。

好,非常感谢!我试试!
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
18楼2013-07-29 17:08:16
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 07bio at 2013-07-29 17:08:11
大意是描述一种方法,可以消除引物二聚体的积累
These observations led to the hypothesis that a system could be developed whereby the accumulation of PDs in a PCR may be eliminated
具体方法是在引物的 ...

如果用高浓度的模板的话,模板大概用多少比较合适?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
19楼2013-07-29 17:11:39
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07bio

木虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-07-29 17:11:39
如果用高浓度的模板的话,模板大概用多少比较合适?...

看你做什么了,50 ng/ul绝对够多了
20楼2013-07-29 17:32:38
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