24小时热门版块排行榜    

查看: 4494  |  回复: 3

beescity

至尊木虫 (著名写手)


[交流] 如何确定引物二聚体和扩增产物的Tm值?

最近在做qPCR,今天遇到个样品的浓度很低,想看看能不能做出样品10倍梯度稀释的曲线,于是照常做了。
结果最后的溶解曲线发现,头三个的Tm是84,之后的5个样品时77。从Ct值来看,也是头三个还有点像样,后面的Ct都是33-34.

很显然后面的5个应该不是扩增产物,应该是奈不住寂寞的引物二聚体之类的非目的产物。
这类杂志的Tm值,能有办法界定吗?
还有,目的扩增产物的Tm值又该怎么查询呢?这个问得是具体操作啦。就算用软件,也还是告知一下操作流程。

谢谢啦!
还是补个图吧,意思一下就是啦。这只是一时手痒做的,不是很好啦。


[ Last edited by beescity on 2012-10-9 at 22:55 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
beescity: 金币+1 2012-10-10 09:02:06
不用查,最好的办法就是把PCR产物跑个胶,加MARKER,就一目了然了。
2楼2012-10-10 08:19:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
beescity: 金币+1 2012-10-10 09:00:47
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-10 19:14:55
引物二聚体通常比扩增产物低的温度下融化。所以看你的melting curve那几个77度的肯定是因为二聚体了。从你的那三个84度的也有低温度产物的小鼓包。其实形不形成引物二聚体和引物的设计有关,好的引物即使是用负对照模板也不会有引物二聚体形成的。CT 33,34的应该不算什么。我还做过丰度特别低的基因,CT在36,也没有引物二聚体形成。如果想做好qPCR,你最好重新设计下引物。
3楼2012-10-10 08:36:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beescity

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-10 08:36:33
引物二聚体通常比扩增产物低的温度下融化。所以看你的melting curve那几个77度的肯定是因为二聚体了。从你的那三个84度的也有低温度产物的小鼓包。其实形不形成引物二聚体和引物的设计有关,好的引物即使是用负对照 ...

原来如此。这对引物不是很好,的确准备换了。
4楼2012-10-10 09:01:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 beescity 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 环境工程调剂 +4 大可digkids 2026-03-16 4/200 2026-03-16 14:00 by laoshidan
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 求调剂! +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见