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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
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lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关 已有2人参与

初学QPCR，请大家多多指教，已经问过实验室的师兄了，不过依然有一些问题，还是不明白，
师兄说溶解曲线里是看不出引物二聚体峰的，但是我的空白对照三复孔之一出现了一个峰，我怀疑是引物二聚体峰。最后希望大家帮我分析下，我这个引物能用吗？或者如何改变PCR条件？在此谢谢木虫的朋友们了！
附图如下：

求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
扩增曲线


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-1
扩增效率图


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-2
模板10倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-3
模板100倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-4
模板1000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-5
模板10000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-6
空白对照溶解曲线峰
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1楼 2014-09-02 10:59:15
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呆的呆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-03 17:53:48
lmc2537: 金币+16 2014-09-29 20:26:25
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我的电脑只看到了模板稀释10倍的溶解曲线，只有一个主峰，应该没有引物二聚体的出现，你可以把做过qpcr的反应在电泳上跑下看看，是不是一条条带。。
我也是初学者，第一次回帖帮别人，希望能对你游泳呀！
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小虾米和不倒翁
2楼2014-09-02 21:56:13
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 呆的呆 at 2014-09-02 21:56:13
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我 ...

谢谢你的耐心解答！
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3楼2014-09-03 17:53:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+2 2014-09-04 14:49:06
lmc2537: 金币+2 2014-09-29 20:26:30
不是引物二聚体，是非特异性扩增带
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4楼2014-09-04 11:28:04
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-04 11:28:04
不是引物二聚体，是非特异性扩增带

那为什么我跑胶没看到非特异条带啊，只有最下方100bp以下的引物二聚体，且空白对照也有一个孔有峰。
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5楼2014-09-04 14:48:54
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