应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
51/1返回列表
查看: 3860  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关 已有2人参与

初学QPCR，请大家多多指教，已经问过实验室的师兄了，不过依然有一些问题，还是不明白，
师兄说溶解曲线里是看不出引物二聚体峰的，但是我的空白对照三复孔之一出现了一个峰，我怀疑是引物二聚体峰。最后希望大家帮我分析下，我这个引物能用吗？或者如何改变PCR条件？在此谢谢木虫的朋友们了！
附图如下：

求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
扩增曲线


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-1
扩增效率图


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-2
模板10倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-3
模板100倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-4
模板1000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-5
模板10000倍稀释溶解曲线峰


求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关-6
空白对照溶解曲线峰
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-02 10:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呆的呆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-03 17:53:48
lmc2537: 金币+16 2014-09-29 20:26:25
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我的电脑只看到了模板稀释10倍的溶解曲线，只有一个主峰，应该没有引物二聚体的出现，你可以把做过qpcr的反应在电泳上跑下看看，是不是一条条带。。
我也是初学者，第一次回帖帮别人，希望能对你游泳呀！
赞一下(1人) 回复此楼
小虾米和不倒翁
2楼2014-09-02 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 呆的呆 at 2014-09-02 21:56:13
楼主你好，我最近也在学习qpcr， 昨天刚做了一个标准曲线的实验。首先从你上的图看，你的pipetting还有待提高呀。尽量让三个repeat都重合，这样结果才可信。 从数值上来看 你的斜率不到3.3，扩增效率不是特别好。我 ...

谢谢你的耐心解答！
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-03 17:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+2 2014-09-04 14:49:06
lmc2537: 金币+2 2014-09-29 20:26:30
不是引物二聚体，是非特异性扩增带
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-04 11:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-04 11:28:04
不是引物二聚体，是非特异性扩增带

那为什么我跑胶没看到非特异条带啊，只有最下方100bp以下的引物二聚体，且空白对照也有一个孔有峰。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-04 14:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lmc2537 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:38 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:14 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭