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PCR条带问题 已有12人参与
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请问各位大神第一张图是什么情况？我是PCR完了跑胶的。为什么只有拖带没有目的条带呢？第二张图条带很淡要怎么样条带才能亮啊？ IMG_9737.JPG  IMG_9728.JPG |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
asako2010(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:41:54
感谢参与，应助指数 +1
asako2010(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:41:54
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两张图里很明显的引物二聚，说明引物几乎没有结合模板。按照你所说的之前能扩增出来，现在扩不出来，那么你的PCR的温度应该是没有问题的。有可能出问题的方面有： 1. 污染。包括引物，水，Buffer和酶等等。确定你跟以前用的是同样的东西。你可以借一些别人的引物，用这些试剂试着扩增些别的东西，如果能够扩增成功，说明你的试剂是没有问题的。那么问题有可能是在引物或者模板上。 2. 模板质量问题。不知道你这次用的模板和以前是不是一样的，还是新制备的。很有可能是你在制备新的模板的时候DNA提纯过程出了问题。比如DNA沉淀用的乙醇没有滤干净。离子也会影响PCR的扩增。 |
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11楼2014-07-22 02:48:14
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 20:40:21
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 20:40:21
| 你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因，以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物，我们必须确定最佳的PCR条件，构建最合适的PCR体系。PCR体系包括：模板、引物、底物、酶、缓冲液、双蒸水。根据引物序列，推测出退火的最适温度，确定PCR反应参数，然后确定PCR体系应加的各成分的最适量。摸索PCR体系及参数时，我们使用的是小体系，如20μl。待条件确定后，再进行体系扩大，最好是体系不变，管数增加，这样有利于获得理想的结果，因为有时候单纯等体积扩大体系难以获得理想结果。 |
2楼2014-07-20 18:59:03
leonaliu2013
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