24小时热门版块排行榜    

查看: 2166  |  回复: 29
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

asako2010

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带问题 已有12人参与

请问各位大神第一张图是什么情况?我是PCR完了跑胶的。为什么只有拖带没有目的条带呢?第二张图条带很淡要怎么样条带才能亮啊?

PCR条带问题
IMG_9737.JPG


PCR条带问题-1
IMG_9728.JPG
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asako2010

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-21 13:57:33
1、你的“产物”主要是引物二聚体。
2、原因是多方面的,你需要回头看一下你的引物序列(主要是GC比例)、甚至扩增产物的GC比例、理论Tm值等等。
3、改善措施:
(1)尝试提高annealing温度(不是降低!),最好 ...

可是几天前还能扩出来现在就不行了,是不是引物被污染了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2014-07-22 00:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-07-20 20:40:21
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因,以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物,我们必须确定最佳的PCR条件,构建最合适的PCR体系。PCR体系包括:模板、引物、底物、酶、缓冲液、双蒸水。根据引物序列,推测出退火的最适温度,确定PCR反应参数,然后确定PCR体系应加的各成分的最适量。摸索PCR体系及参数时,我们使用的是小体系,如20μl。待条件确定后,再进行体系扩大,最好是体系不变,管数增加,这样有利于获得理想的结果,因为有时候单纯等体积扩大体系难以获得理想结果。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-07-20 18:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-20 20:40:29
降低退火温度试一下,你的引物二聚体很亮,也有可能是两个引物的序列容易形成二聚体。个人建议,先降低退火温度,最低退火温度可以使48度,如果还是无法使目的条带变亮,那么重新设计引物。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-07-20 19:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asako2010

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-07-20 18:59:03
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因,以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物,我们必须确定最佳的PCR条件,构建最合适的 ...

谢谢啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-07-21 13:34:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-17 12:05 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 3/150 2026-09-17 06:50 by k06BKNblrGRH
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 4/200 2026-09-17 05:50 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:28 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 03:50 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-17 03:40 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 8/400 2026-09-17 02:04 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-16 21:39 by MHf40yA0Uhyb
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 11/550 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[考博] 申博发邮件 +4 Lmengk 2026-09-15 4/200 2026-09-16 00:05 by 木心想继续深造
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
信息提示
请填处理意见